鸡传染性支气管炎变异毒株的分离鉴定及其免疫原基因的序列分析

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2、I!!；j。卜学位论文山东农业大学硕士学位论文中文摘要鸡传染性支气管炎(InfectiousBronchitis，IB)是由冠状病毒科(Coronavirdae)冠状病毒属(Coronavirus)的传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchit捃virus，IBV)引起的一种急性高度接触性传染病。自30年代在美国爆发以来，现已成为世界各地流行的重要禽病。IBV是单股RNA病毒，该病毒基因可因点突变和重组而发生变异，故传染性支气管炎病毒血清型较多。已知的血清型有以侵害呼吸道为主的Corm、Iowa97、JMK、Florida、Arkansas99等和以侵害肾脏

3、为主的M41、Holte、Gray、Australia“T”等30余种。Gough等(Goughetal，1992)报道了英国一种新的793／B血清型的IBV，该毒株和其它血清型传支毒株之间无交叉血清学关系：其免疫原基因sl的序列与欧洲17个传支毒株之间差异高达21—25％。目前，该血清型IBV在西班牙、德国、荷兰、意大利、泰国等国均有发生和流行，对养鸡业危害较大。近年来，山东省各地蛋鸡饲养场不断发生以蛋鸡产蛋下降为主要症状的疾病，给全省的养鸡业造成严重的损失，为查明引发该类疾病的确切病因，找出确切的病原，2002年我们对山东省泰安市某发病典型的蛋鸡场疑似传染性支气管炎

4、病例展开了病原的实验室分离和鉴定工作。无菌采集发病鸡的气管、肺脏、盲肠扁桃体、肾脏等组织，按照常规试验方法接种SPF鸡胚增殖病毒，传三代后收获尿囊液，用鸡的1％红细胞进行血凝试验检验是否含有新城疫病毒、流感病毒。结果表明，尿囊液无直接血凝活性。对超速离心纯化的尿囊液电境下观察可发现圆形表面有纤突的直径90nm左右的典型冠状病毒粒子，随即采用I型磷酸酯酶C处理纯化后的病毒，再次验证尿囊液的血凝活性，结果显示处理后的尿囊液具有血凝性，初步试验表明分离到的病毒可能为鸡传染性支气管炎病毒(IBv)。进一步经致鸡胚矮小化试验、新城疫病毒B1株干扰试验和动物回归试验印证了分离到的病

5、原为鸡传染性支气管炎病毒。鸡传染性支气管炎变异毒株的分离鉴定及萁免疫原基因的序列分析对该鸡传染性支气管炎病毒分离株的理化性质包括EID50、TOCID50、氯仿敏感试验、乙醚敏感试验、热稳定试验和酸碱稳定试验做了进一步的鉴定。使用气管环组织培养交叉中和试验鉴定分离株的血清型，结果显示该病毒与常见的传染性支气管炎病毒血清型之间没有或仅有少量的交叉保护性。因发病鸡除产蛋下降外，无明显的临床症状和病理变化，与英国Gough报道的传染性支气管炎793／B症状相似，为进一步了解该IBV分离株的特性从而鉴定其血清型，采用了A．Adzhar等(Adzhaetal，1997)等发表的与

6、VN试验结果相一致的血清型特异性引物经RT-PCR方法成功扩增到了该IBV分离株的s1基因，初步结果显示，该分离株血清型为793／t3血清型。对分离株的S1基因进行克隆与测序，使用DNAStar软件进行序列分析结果显示，该传染性支气管炎分离株的s1基因与常见的IBV血清型Mussachusetts、Arkansas、Connecticut、T、Gray等血清型S1基因同源性为77．2～78．7％，由S1基因编码的氨基酸序列同源性为74．5～78．3％，差异均在20％以上。而与OenBank上注册的7株793／B血清型IBVS1基因序列比较显示，核菅酸同源性为96r2～9

7、9．6％，S1基因推导的Sl氨基酸同源性为93．0～99．4％，更进一步说明了分离到的IBV毒株系一株793／B血清型IBV。将该分离株的S1基因在GenBank注册(登录号：AY837465)并使用BLAST软件分析显示，分离到的IBV毒株与4／91Pathogenic同源性最高，推测分离毒株可能系由国外传入我国。关键词：鸡传染性支气管炎病毒，S1基因，793／B毒株，序列分析山东农业大学砸jj学位论文英文摘要AbstractInfectiousBronchitis(IB)isasevereacuterespiratorydisease