大叶木姜子多糖含量测定与抑菌作用研究.doc

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1、大叶木姜子多糖含量测定与抑菌作用研究　　摘要：从大叶木姜子中提取精制多糖，测定出大叶木姜子多糖对葡萄糖的换算数据，用蒽酮－硫酸比色法测定计算多糖的含量；采用Ｆｅｎｔｏｎ反应体系为模型，研究多糖对细菌和真菌的抑制作用；采用滤纸片固定反应时间法研究多糖的体外抑菌作用。测得大叶木姜子多糖含量为４．８８％，多糖对金黄色葡萄球菌有较好的抑制作用，对酵母菌、灰绿曲霉和黑曲霉有一定的抑制效果。　　关键词：大叶木姜子；多糖；含量测定；抑菌作用　　中图分类号：S476+.9文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11401－0076-03　　　

2、　ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＣｏｎｔｅｎｔＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄＡｎｔｉ－ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃｆｒｏｍＬｉｔｓｅａｃｈｕｎｉｉＣｈｅｎｇｖａｒ．ｌａｔｉｆｏｌｉａＨ．Ｓ．Ｋｕｎｇ　　　　ＨＡＮＪｕｎ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍＬｉｔｓｅａｃｈｕｎｉｉＣｈｅｎｇｖａｒ．ｌａｔｉｆｏｌｉａＨ．Ｓ．Ｋｕｎｇ，ａｎｄｉｔｓｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｗａｙｏｆａｎｔｈｒｏｎｅ-ｓｕｌｐｈｕｒｉｃａｃｉｄcelorimetry．Ｉｔｓｂａｃｔｅｒｉ

3、ｏｓｔａｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎｂａｃｔｅｒｉｕｍａｎｄｆｕｎｇｕｓｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙＦｅｎｔｏｎｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍａｓａｍｏｄｅｌ．Thebacteriostasisinvitrowasstudiedbyfilterpaperfixingthereactiontime.ＴｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＬｉｔｓｅａｃｈｕｎｉｉＣｈｅｎｇｖａｒ．ｌａｔｉｆｏｌｉａＨ．Ｓ．Ｋｕｎｇｒｅａｃｈｅｄ４．8８％．Ｉｔｈａｄｇｏｏｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏ

4、ｎSｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓａｎｄcertainｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｎyeast，ＡｓｐｅｎｇｉｌｌｕｓglaucusａｎｄＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＬｉｔｓｅａｃｈｕｎｉｉＣｈｅｎｇｖａｒ．ｌａｔｉｆｏｌｉａＨ．Ｓ．Ｋｕｎｇ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃｅｆｆｅｃｔ　　　　大叶木姜子Ｈ．Ｓ．Ｋｕｎｇ），樟科木姜子属植物，灌木或小乔木。用于治疗风寒湿痛、跌打肿痛、产后水肿和寒泻，对心血管疾病也有

5、一定的疗效［１］。多糖是一类免疫活性物质，具有抗肿瘤、抗病毒、抗寄生虫、抗衰老、抗菌、抗凝血、抗辐射等药理作用［２－５］。本研究采用石油醚去脂―９５％乙醇去杂―热水提取―活性炭去色素的提取工艺，从大叶木姜子中提取多糖，测得大叶木姜子多糖对葡萄糖的换算因子，用蒽酮―硫酸比色法测定并计算大叶木姜子多糖的含量，用于在实验室培养出来的细菌和真菌的抑制作用，期望为大叶木姜子的综合开发利用提供参考。　　１材料与方法　　１．１仪器、用品及材料　　１．１．１仪器７２１分光光度计、ＵＶＰｒｏｂｅ－２５５０型紫外可见光光度计、电子天平、ＤＺＫ

6、Ｗ－Ｄ－２型数显电热恒温不锈钢水浴锅、离心机、蒸馏装置、抽虑装置、医用手提式压力锅、冰箱、ＧＸＺ型智能光照培养箱。　　１．１．２材料大叶木姜子采摘地点为云南省文山州西畴县董马乡七角巷，采摘时间为２００８年４月中旬。灰绿曲霉、青霉、黑曲霉用沙氏真菌培养基培养，菌种来源于微生物室制备；酵母菌来源于白酒中；金黄色葡萄球菌用高盐肉汤培养基培养。　　１．１．３试剂无水葡萄糖；蒽酮；硫酸、活性炭；醋酸铅；硫酸钠；无水乙醇、石油醚等。　　１．２方法　　１．２．１大叶木姜子多糖的提取与精制取干燥大叶木姜子粉末１００ｇ，置抽滤装置中，加入石

7、油醚３５０ｍＬ，回流脱脂。用９５％乙醇回流提取３次，每次６倍量，残渣挥干溶剂后，再蒸馏回流提取３次，每次６倍量，合并提取液，过滤、加入０．５％活性炭脱色１次，加入氯仿－正丁醇液轻摇，静置取多次，除去蛋白质。用离心机在２５００ｒ／ｍｉｎ转速下离心１次，提取上层澄清液，加入醋酸铅直至溶液不产生沉淀为止，过量的醋酸铅加适量的硫酸钠除去，再在２５００ｒ／ｍｉｎ转速下离心１次，提取上层清液。加热溶液浓缩至１／５体积，滤液加３倍量无水乙醇静置一夜后蒸馏提纯，得到大叶木姜子多糖。　　１．２．２大叶木姜子多糖含量测定　　１）标准溶液的配制

8、。精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品０．２００ｇ，置１００ｍＬ容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度；摇匀，制成２．０００ｍｇ／ｍＬ的标准溶液，精密量取０．１、０．２、０．４、０．６、０．８ｍＬ标准溶液。置于１０ｍＬ容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，配成系列标准溶液。　　２）蒽酮－硫酸试液的配制。称取０．２