粗叶悬钩子根部多糖含量测定

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1、粗叶悬钩子根部多糖含量测定作者：周建衡，李天骄，洪振丰，胡娟【摘要】目的建立粗叶悬钩子根部多糖的含量测定方法。方法利用苯酚-硫酸法显色，标准曲线在490nm处分光光度法测定粗叶悬钩子根部多糖含量。结果回归方程：Y=0.8325X+0.0223，r=0.9998，测得粗叶悬钩子根多糖含量9.473%，平均回收率为99.69%，RSD=0.56%（n=6）。结论该方法简便，精密度及重现性均较好，可用于粗叶悬钩子多糖的提取和含量测定。【关键词】粗叶悬钩子；多糖；苯酚-硫酸法;分光光度法　　Abstract：ObjectiveTostudythe

2、optimumextrationprocessofpolysaccharidesfromRubusalceaefoliusPoir.MethodsThecontentofpolysaccharidsfromRubusalceaefoliusPoirinedbyspectrophotometryat490nm．ResultsTheregressionequationethodisprovedtobesimple，accurateandreliable，anditcanbeusedtoextractanddeterminethepolysac

3、charidesfromRubusalceaefoliusPoir.　　Keyination粗叶悬钩子为双子叶植物蔷薇科植物，粗叶悬钩子的根、叶均可入药，具有活血化淤、清热解毒之功效［1］，能清利湿热，并且使湿热内蕴所致的淤毒清除。据广州部队编写的《常用中草药手册》记载：“活血祛淤，清热止血，治急慢性肝炎、肝脾肿大、行军性血红蛋白尿、乳腺炎、外伤出血、口腔炎。”《广西中草药》中记载：“清热，消肿，止血，散淤。”在福建闽南安溪一带广泛应用于各型肝炎的治疗，有着良好的民间用药基础。本文采用苯酚-硫酸法测定粗叶悬钩子根部多糖的含量，得到满意的效

4、果。　　1仪器与药品粗叶悬钩子根部采自福建安溪，经福建中医学院中药系专家鉴定为双子叶蔷薇科悬钩子属植物RubusalceaefoliusPoir；D无水葡萄糖(批号：110833-200302，中国药品生物制品检定所);95%乙醇、浓硫酸均为国产分析纯，苯酚(临时配制)。UV-722分光光度计(上海分析仪器厂)；BP2110电子分析天平秤（德国赛多利斯公司）；DHG9240型电热恒温干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；RK52A型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。　　2方法与结果　　2.1葡萄糖标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重

5、的葡萄糖50.52mg，用蒸馏水溶解并定容到100ml即为0.5052mg/ml的葡萄糖标准溶液。　　2.2苯酚溶液的配制取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO30.05g，蒸馏，收集182℃馏份，称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。　　2.3标准曲线绘制精密量取葡萄糖标准溶液0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml置具塞三角烧瓶中，分别加蒸馏水使成2.0ml，再分别加入5%苯酚溶液6.0ml，摇匀，然后逐滴缓慢加浓硫酸30.0ml，充分摇匀、散热，再转移到50.0ml容量瓶中，加蒸馏水定容至50.0ml

6、在30℃水浴恒温30min，取出冷却至室温。另以蒸馏水同上操作为空白对照，在490nm处测定吸光度，绘制标准曲线，建立回归方程：Y=0.8325X+0.0223r=0.9998，线性范围2.02～20.2μg/ml。　　2.4粗叶悬钩子多糖的提取及精制［2］将粗叶悬钩子根于ESP350型粉碎机中粉碎呈粉末，取粗叶悬钩子粉50g置于1000ml烧瓶中，加水（固液比1∶10）微沸回流3次，1h/次，抽滤，合并提取液，蒸发至300ml，加入无水乙醇使得醇浓度不低于70%,析出沉淀,过滤得析出物，加水溶解再次抽滤得液体，用Sevag法除去蛋白（重

7、复3次），加无水乙醇使醇浓度达80%以上,置冰箱中静置过夜，倾去上清液得沉淀，加无水乙醇搅拌后抽滤,得滤渣,滤渣用无水乙醇、丙酮洗涤多次，沉淀干燥得多糖纯品。　　2.5换算因子测定　　精确称取65℃干燥恒重的粗叶悬钩子多糖20mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，作为多糖储备液。精确量取多糖储备液0.10ml，加水至1.00ml，按测定标准曲线的方法测其吸光度值，根据标准曲线计算浓度。按下式计算换算因子：f=］.上海：上海科学技术出版社，1999：461.