粗多糖含量测定方法学验证(范本)

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1、粗多糖含量测定方法学研究资料一、仪器与试药1二、方法的研究11.检测波长的测定12.样品及对照制备方法1三、方法学验证11.线性12.精密度实验13.稳定性实验14.重复性试验15.重现性实验16.准确度试验1芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度

2、成正比，在625nm波长下比色测定。主要研究资料如下：一、仪器与试药1、仪器(1)离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）；(2)离心管：50ml；(3)水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号DK-S26）；(4)旋涡混合器（DioCote，SA8）；(5)SHIMADZUUV-1800紫外可见光分光光度计；(6)JB760-68石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）；(7)TU-1901双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；2、试药(1)葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为20110

3、602-1；(2)无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为1608021；(3)蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为20131127；(4)硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为20150404-1；(5)葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（0.1mg/ml）。(6)0.1%蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取0.1g蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。现用现配。3、试样(

4、1)样品颗粒：XXXXX有限公司提供。二、方法的研究粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，本研究针对葡萄糖对照以及样品的的吸光度进行检测波长测定，如下所示：1.检测波长的测定取葡萄糖对照品溶液、样品溶液进行紫外光谱扫描，结果显示对照品和样品均在625nm波长附近有最大吸收。序号波长吸光度1625.000.3602509.500.2713422.500.262序号波长吸光度1760.000.0552624.500.154芪参颗粒样品溶液紫外波长吸收图葡萄糖对照品紫外波长吸收图

5、2.样品及对照制备方法（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品2.0g，置于100ml容量瓶中，加水80ml左右，于沸水浴中加热1小时，冷却至室温后补加水至刻度（V1），混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。（2）沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）5.0ml（V2），置于50ml离心管中（或2.0ml于15ml具塞离心管中），加入无水乙醇20ml（或8ml），混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。残

6、渣用水溶解并定容至10ml（V3）。（3）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.0ml、1.2ml（相当于葡萄糖0mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg、0.12mg）置于10ml比色管中，补加水2.0ml，加入0.1%蒽酮硫酸溶液6ml，在旋涡混合器上混匀，置沸水浴中加热10min，取出，在流水中冷却20min后，用分光光度计在625nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵

7、坐标，绘制标准曲线。（4）样品测定：准确吸取样品待测液2.0ml（含糖量20—100μg），按标准曲线绘制步骤于625nm波长下测定吸光度值并求出样品含量。三、方法学验证1.线性取适量葡萄糖对照品，精密称定，加水制成0.1094mg/ml的葡萄糖对照品储备溶液，分别精密吸取葡萄糖对照品储备溶液0ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.0ml、1.2ml，置于10ml比色管中，补加水2.0ml，依法测定。得标准曲线储备液。依法测定，分别制成含葡萄糖为0、21.88μg、43.76μg、65.44μg、8

8、7.52μg、109.40μg、131.28μg的溶液，以吸光度（Y）为纵坐标，葡糖糖对照品的含量（X）为横坐标，绘制标准曲线，见下图，其回归方程为：y=0.00507x+0.0048（r=0.99989），试验表明葡萄糖对照品在0～131.28μg范围内呈良好线性关系。见表