峨眉山粗老茶中茶多糖的含量测定

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1、峨眉山粗老茶中茶多糖的含量测定王妍馨颜仁龙张小荣熊瑞生【摘要】　　目的提取峨眉山粗老茶中茶多糖并测定其含量。方法采用水提醇析法提取茶多糖；蒽酮-硫酸分光光度法测定茶多糖含量；Sevage法除蛋白；由换算因子计算茶多糖含量。结果峨眉山粗老茶中茶多糖平均含量为4.23%，RSD=2.12%，加样回收率99.2%，RSD为1.82%。结论不同品种中，峨眉山粗老茶中茶多糖含量较高。【关键词】峨眉山粗老茶茶多糖提取　　茶多糖(Teapo1ysaccharides，简称TPS)是茶叶中一类与蛋白质结合在一起的酸

2、性多糖或酸性糖蛋白。近年来文献报道，茶多糖具有降血糖、降血压、耐缺氧及增加冠状动脉血流量、增强机体免疫功能、抗癌、抗氧化等多方面的生物学功能。峨眉山以其独特的自然资源优势，丰富的茶叶资源著称。据报道〔1〕,茶叶越粗老,多糖含量越高。目前市场上粗老茶（茶树修剪下的枝叶，茶叶加工过程中的枝叶和灰末等副产品，品质较劣的茶叶）利用率较低,若从其中提取茶多糖则可变废为宝,能为中低档茶叶的综合利用开辟一条新途径。　　1材料与仪器　　1.1材料粗老茶（购自峨眉山市售散装等外茶叶或采于峨眉山报国寺周边的茶树老叶）。

3、　　1.2试剂实验中所用化学试剂均为分析纯。　　1.3蒽酮-硫酸试液配制方法将0.6671g蒽酮溶于200ml浓硫酸，置于棕色瓶中冷藏备用。　　1.4仪器TU1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；KQ2200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。　　2方法与结果　　2.1含量测定　　2.1.1茶叶多糖的提取与精制称取40目干燥茶叶粉末20g，置索氏提取器中，100ml石油醚（沸程60～90℃）90℃水浴回流脱脂1h，过滤，挥干溶剂，200ml80%乙醇90℃水浴回

4、流1h，重复2次。双层滤布过滤，滤渣加400ml蒸馏水，沸水浴回流提取1h，间歇搅拌，重复1次，合并两次滤液，离心分离(4000r·min-1，10min)，真空浓缩(50℃，0.09MPa)至20ml。Sevage法除蛋白。加入4倍量无水乙醇，4℃过夜醇沉，离心分离，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗两次，红外干燥（60℃），即得精制茶多糖。称重得精制茶多糖0.9447g，得率为4.72%。　　2.1.2标准曲线的绘制称取无水葡萄糖对照品适量，加蒸馏水配成1.0008mg·ml-1的标准溶液。精密

5、移取对照品溶液1，2，4，6，8，10ml，分别置100ml容量瓶，各加水至刻度，摇匀。分别精密移取上述标准溶液各2.0ml，置具塞试管中，以2ml蒸馏水作空白，每管再加8ml蒽酮-硫酸试液，立即摇匀，冰水浴冷却。沸水浴中加热7min，流动水冷却至室温，10min后在575nm处测定吸光度，以吸光度（A）对葡萄糖浓度（C）作回归处理，得回归方程：C=105.03833A－7.24989，r=0.9995，线性范围：10.008～100.08μg·ml-1。　　2.1.3换算因子的测定精确称取干燥至恒

6、重的精制茶多糖0.0105g，蒸馏水溶解，定容于25ml容量瓶，90℃水浴加热，超声1min增溶，摇匀，制得茶多糖贮备液。蒽酮-硫酸法测定其吸光度（A），由回归方程求出贮备液中葡萄糖浓度，测得其葡萄糖含量，按下式计算换算因子。因茶多糖干燥后溶解性降低，故按“2.1”中的方法制得多糖提取液后取等量两份，经醇沉洗涤后，一份直接加蒸馏水溶解（复水性好），定容，测定吸光度和茶多糖含量；另一份干燥至恒重，称得精制茶多糖的干重，由二者计算平均换算因子f。　　f=g)，C为精制茶多糖贮备液中葡萄糖浓度(mg·ml

7、-1)，D为多糖的稀释因素。测出换算因子f=12.1。　　2.1.4样品含量测定样品溶液的制备:精确称取40目茶粉1g，加80%乙醇40ml，95℃水浴回流1h，趁热抽滤，滤渣用80%热乙醇洗涤(10ml×2)。挥干溶剂后，滤渣连同滤纸置于烧瓶中，加100ml蒸馏水，100℃水浴浸提1h，趁热抽滤，滤渣用热蒸馏水洗涤(10ml×2)，合并滤液，离心分离(4000r·min-1，10min)，上清液置于100ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀。精确称取上述样品溶液1ml，置于100ml容量瓶中，加

8、蒸馏水溶解并稀释至刻度，90℃水浴加热，超声1min增溶，摇匀，制得茶多糖样品液，蒽酮-硫酸分光光度法法测定其吸光度（A），由回归方程计算试液中葡萄糖浓度（C），按下式计算样品中茶多糖平均含量为4.23%，RSD=2.12%（n=5）。　　多糖含量(%)=C×D×f/g·ml-1），D为多糖的稀释因素，f为换算因子，l于具塞试管中，按照“2.1.2“项下方法处理，每间隔1h测定吸光度，RSD=0.23%（n=5），显色在5h内稳定。　　加样回收率:精确称取3份40目茶