多糖含量测定.doc

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1、多糖含量的测定参照国标NY/1676-2008一、实验原理多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚反应生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收，与标准曲线比较定量。二、试剂1、硫酸（H2SO4，国药集团），ρ=1.84g/mL；2、无水乙醇（国药集团）；3、苯酚（国药集团），重蒸馏；4、80%乙醇溶液（国药集团）；5、葡萄糖（国药集团），使用前于105℃恒温烘干至恒重；6、80%苯酚溶液：称取80g苯酚于100mL烧杯中，加水溶解，定容至100ml后转至棕色瓶中，置4℃冰箱

2、中避光贮存。7、5%苯酚：吸取5mL，80%的苯酚溶液，溶于75mL水中，混匀，现配现用。8、100mg/L标准葡萄糖溶液：称取0.1000g葡萄糖于100mL烧杯中，加水溶解，定容至1000mL，4℃冰箱中避光贮存。三、仪器双光束紫外可见分光光度计（TU-1901；北京普析通用仪器有限责任公司）分析天平（0.0001g；奥豪斯）超声提取器（KQ-500B;昆山市超声仪器有限公司）高速离心机（常州中捷实验仪器制造有限公司）四、操作步骤1、样品的提取称取样品0.1g于离心管中，加入20mL无水乙醇，

3、充分混匀后超声提取30min，然后4000r/min离心10min，弃去上清液，不溶物用10mL乙醇溶液洗涤、离心。用水将上述不溶物转移至圆底烧瓶中，加入50mL水，沸水浴回流提取2h。冷却至室温，过滤，将上清液转移至100mL容量瓶中，残渣洗涤2-3次，洗涤液转移至容量瓶，加水定容。2、标准曲线分别吸取0、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL标准液至试管中，蒸馏水补至1.0mL。向试液中加入1.0mL5%苯酚溶液，快速加入5mL硫酸，静置10min。充分混匀后将试管放置于3

4、0℃水浴中反应20min,在490nm处测吸光度，以浓度为横坐标，吸光度未纵坐标，绘制标准曲线3、测定吸取1.00mL样品溶液于20mL具塞试管中，按照1、2操作，测定吸光度，同时做空白实验五、计算公式X（%）=m1*v1/(m2*v2)*0.9*10-4m1标曲上查的样品测定液中含糖量，μg；v1样品定容体积，mL；v2比色测定所移取样品测定液体积，mL；m2样品质量，g；0.9葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数