槐角多糖含量测定方法的研究.doc

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1、槐角多糖含量测定方法的研究【关键词】紫外分光光度法槐角多糖提取含量测定多糖类化合物是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性。某些多糖不但具有抗癌、抗炎、抗病毒、抗衰老等作用，还是理想的免疫增强剂。目前对多糖的研究不断深入，而且不断有新的多糖被发现，但从槐角中提取多糖还未见有文献报道。我们从槐角中提取出多糖，并测定了槐角多糖的含量。1材料与方法1.1仪器与试剂UV-265WF紫外-可见分光光度计（日本岛津）;722型分光光度计（上海第三分析仪器厂）。苯酚试剂:苯酚200g加铝片0.2g和碳酸氢钠O.l

2、g，蒸馏收集180～182℃馏分。称取30g加蒸馏水溶解，定容于500ml容量瓶中，放入棕色瓶中，冰箱中保存备用。其他试剂均为分析纯。样品槐角于石家庄市冬季采摘，常水清洗，去除杂质，80℃干燥去除水分，通风阴凉处保存。经鉴定符合中国药典2000年版槐角项下规定。1.2方法1.2.1标准曲线的制备取干燥的葡萄糖标准品100mg，加水溶解并定容至于100ml。精密量取标准液10μl、20μl、40μl、60μl、80μl、100μl，分别置具塞试管中，加蒸馏水稀释至2.0m1，摇匀，加6%苯酚溶液1ml，迅

3、速加浓硫酸5ml，室温放置40min，以2.0ml蒸馏水，1ml苯酚液，5ml浓硫酸混合液按上述操作做空白，用紫外-可见分光光度法，在490nm波长处测定吸收度（A），对测得数据进行线性回归，回归方程为:A=0.7016C+0.0137，相关系数r=0.9998。1.2.2换算因素的测定精密称取60℃干燥至恒重的槐角多糖精制品35mg（方法见槐果多糖制备方法的研究），置100ml容量瓶中，加入少量蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.1ml，照标准曲线制备项下的方法测定吸收度。从回归方程中求出多糖

4、供试液中葡萄糖的浓度。按下式计算换算因素:f=W.（C×D）。式中W为多糖重量，C为多糖稀释液中葡萄糖的浓度，D为多糖的稀释因素;测得f=2.222。　　1.2.3供试液的制备取80℃干燥1h的槐角粉沫5g，精密称定，置索氏提取器中，加入10倍量95%乙醇提取3次，除去黄酮等醇溶性杂质，每次2h，药渣置通风处自然晾干后置烧瓶中，加水50ml，水浴（90～100℃）提连续提取3次，每次2h，提取液合并，高速离心后过滤，滤液逆向流水透析，除去小分量物质及色素，透析内液定容至500ml，得供试液。　　1.2.

5、4稳定性实验取样品溶液按标准曲线制备项下的方法测定吸光度，每隔lh测定一次，结果表明5h内稳定性良好。1.2.5回收率测定2精密称取槐角粉末0.15g，加入槐角多糖7.0mg，再于索氏提取器中用95%乙醇回流2h，残渣溶剂挥去后，连续用水回流2h，反复洗至250m1容量瓶中定容。摇匀后，精确移取lml，按绘制标准曲线方法测其吸光度值，按样品测定方法进行测定。计算多糖含量、平均回收率为103.9%，RSD=2.61%（n=3）。1.2.6含量测定精密量取供试品液0.1ml，加水1.9m1，按标准曲项下方法

6、操作，测定吸收值，从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量。按下式计算样品中多糖含量。多糖含量（%）=C.D.f×100W，其中C为供试液中葡萄糖的浓度（ug.ml），D为供试液的稀释因素，f为换算因素，W为供试样品重量（ug）。测得多糖平均含量为50.4%。　　2讨论2.1多糖在强酸作用下水解生成单糖，并迅速脱水生成糠醛，糠醛与酚性物质如苯酚缩合成有色化合物，反应迅速，完全，有色物质稳定，并且有色物生成量与多糖浓度存在定量关系，这样用分光光度法在适当波长处可以得到多糖含量。本法简便快速，易行。2.2多糖广

7、泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性［1，2］，是理想的免疫增强剂。它能促进T细胞、B细胞、NK细胞、Mφ细胞等免疫细胞的功能，还能促进白介素、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子的产生。同时槐角中还含有大量的黄酮类化合物。目前对多糖和黄酮的研究方兴未艾，多糖和黄酮的作用机理以及生物功能与结构的关系的研究不断深入，而且不断有新的多糖类物质被发现。我们仅测定了槐角中多糖的含量，槐角多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。【参考文献】1雷晓凌，赵树进，范秀萍，等.弯斑蛸多糖对小鼠免疫活性的

8、影响.中药材.2007，30（2）:188-192.2李建军，雷林生，余传林，等.灵芝多糖抗肿瘤作用的免疫学相关性研究.中药材.2007，30（1）:71-73.2