银杏叶多糖提取、纯化及其含量的测定

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1、银杏叶多糖提取、纯化及其含量的测定【摘要】目的研究银杏叶多糖的提取纯化及含量测定。方法通过对不同的提取次数、固液比及提取时间等实验,以及对粗多糖纯化的研究,确立各因素条件,采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果各因素条件为浸提温度80℃,提取时间3h,固液比1∶30,提取2次,用活性炭纯化。由此得银杏叶中粗多糖的得率为12.2%,纯化后的多糖得率为9.8%。测定提取的粗多糖中多糖含量为35.7%,纯化后的多糖含量为43.3%,多糖含量测定相对标准偏差小于3.0%。结论该方法纯化效果好,测定重现性好,得出银杏叶中多糖含量为4.3%。【关键词

2、】银杏叶多糖提取纯化多糖测定  Abstract:ObjectiveTheextractionandpurificationmethodsforpolysaccharideinGingkoleavesined.MethodsTheconditionofeachfactorforextractionandpruificationfromtheleavesofGingkoentsofextractiontimes,differentratiosofmaterialtoextractionsolventandextractiontime.Th

3、emethodofphenol-sulfuricacidinationofthecontentofthepolysaccharide.ResultsTheconditionsofthefactorsperature80℃,extractiontime3h,materialtoextractionsolvent1:30,extraction2timesandactivatedcarbonforpurification.Raethodisefficientandstable.Thecontentofpolysaccharideingingk

4、oleavesis4.3%.  Keyinationofpolysaccharide  多糖又称多聚糖(polysaccharide),是构成生命活动的四大基本物质之一,不仅是机体主要供能物质,同时还具有多种多样的生物学功能,在生命活动中参与了细胞的各种活动。目前人们所知活性多糖具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、延缓衰老、降血脂、降血糖、解毒、抗辐射等功效[1~5],其作用日益受到人们的重视。银杏(Ginkgo)是冰川时期存活在地球上的孑遗植物,素有“活化石”之称。中国是银杏的发源地,其资源占世界总量的70%左右[6,7]。目前,银杏叶制

5、剂已从单纯的药用逐步应用到食品饮料、保健品等行业,含银杏叶提取物的护发、生发、护肤等化妆品的开发也取得一定的进展。银杏叶内含有具有重要生理和药理活性作用的功能活性成分,但关于银杏叶中多糖的研究目前报道甚少,原因在于人们把精力都集中在了银杏叶中黄酮类物质的研究上[7~12],而忽略了多糖。本实验对银杏叶中多糖提取的影响因素、纯化进行了一系列的研究,确定了提取纯化条件。同时对提取、纯化的多糖含量进行了测定,确定了银杏叶中多糖含量。这对于银杏叶的综合开发利用具有重要意义。  1材料与方法  1.1仪器与试剂恒温水浴,离心机,恒温干燥箱,真空干

6、燥箱,紫外-可见分光光度计。95%乙醇,无水乙醇,三氯甲烷均为分析纯;葡萄糖为生化试剂。  1.2试样来源及预处理所用银杏叶样品,于200511采自大连民族学院校园内。将采得的银杏叶用自来水洗净,然后用蒸馏水清洗,淋干水后,用70℃恒温干燥箱烘干。  1.3提取、纯化方法银杏叶多糖提取、纯化步骤如下:a)银杏叶处理:实验前用70℃恒温干燥箱将银杏叶再烘1次,然后用高速粉碎机粉碎,过80目筛,置于棕色瓶中保存。b)恒温提取:按一定固液比加水,在恒温水浴中恒温提取。c)离心:提取后用离心机以5000r/min离心20min,收集上清液,残

7、渣同前再提取1次,合并两次上清液。d)纯化:离心后得到的上清液,用活性炭纯化。e)浓缩:用真空干燥箱对纯化后的离心液进行浓缩。f)醇沉淀:加入5倍体积的95%乙醇,放入冰箱内静置24h。g)离心:对醇沉的白色絮状多糖沉淀进行离心。h)洗涤:得到的多糖用无水乙醇和三氯甲烷依次清洗后放入小烧杯中,在水浴锅中蒸干后,放入80℃烘箱中干燥。  2结果与结论  2.1多糖提取影响因子实验  2.1.1固液比对粗多糖得率的影响取5份5g银杏叶样品分别放置于250ml具塞三角瓶中,按固液比1∶10,1∶20,1∶30,1∶40,1∶50分别加入50,

8、100,150,200,250ml的蒸馏水,pH7,在80℃水浴中提取3h,然后离心,浓缩,用乙醇沉淀,于冰箱内静置24h后再离心,粗多糖得率见图1。由图1可见,固液比越大越好,但要进行2次提取,因此,固液

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