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1、第10卷第13期2010年5月科学技术与工程Vol10No13May20101671-1815(2010)13-3194-03ScienceTechnologyandEngineering2010SciTechEngng米糠多糖的提取及其含量的测定*梁丹霞顾霞敏许海丹(台州学院医药化工学院,临海317000)摘要对米糠中的多糖进行提取与测定,采用水提醇沉法对米糠中的多糖进行提取,并采用苯酚硫酸法测定其多糖含量,以正交实验优化显色条件。确定检测波长为490nm,确定6%苯
2、酚用量为1.0mL,浓硫酸用量7.5mL,反应时间为30min。在(0.00250.030)mg/mL范围内,呈良好的线性关系。平均回收率为97.8%,RSD=3.89%(n=6)。测得米糠粗多糖含量为20.2%。结果表明方法简单、准确,为继续研究开发提供一定的参考依据。关键词米糠多糖苯酚硫酸法含量测定中图法分类号R284.2TS241;文献标志码A米糠,又名半皮糠,其重量约占整个米粒的诚机械有限公司)。[1]5%5.5%,是一种产量大、综合利用价值还不1.2材料高的农副产品。米糠多
3、糖(RiceBranPolysaccha-原料:水稻米糠。ride,RBP)是一种以-1,6糖苷键为主要结构分子试剂:葡萄糖标准品、-淀粉酶、石油醚、碘酊、量不等的一类非淀粉多糖,是结构复杂的杂聚正丁醇、三氯甲烷、苯酚、乙醚、丙酮、浓硫酸、碳酸[2,3]糖,具有抗肿瘤、免疫增强、抗细菌感染及降血氢钠等均为分析纯,实验用水为蒸馏水。[4,5]糖等生物活性及作用。文献关于米糠油、米糠[68]2方法与结果蛋白及维生素等报道较多,对米糠多糖多限于其性能及生理活性的研究。本文研究了苯酚-硫酸法测定米糠多糖含量的方法,以正
4、交设计优化显色2.1多糖的提取条件,对继续开发、利用米糠资源提供了一定的参取干燥的米糠15g,加入150mL石油醚,在考价值。85下加热回流2次,每次2.0h,进行脱脂。滤渣挥去石油醚后即为脱脂米糠。在脱脂米糠中加入1仪器与材料150mL蒸馏水,加热回流2次,时间分别为2.0h、1.5h。合并滤液,减压浓缩后,加入0.02g淀粉酶加入浓缩液中,在50水浴中反应90min,去除淀1.1仪器粉,离心,取清液。加入3倍体积量的95%乙醇,边UV2401型紫外分光光度计(日本岛津);800加边搅拌,迅速有灰白色沉淀
5、出现,静置,离心分离型离心沉淀器(4000r/min,上海手术器械厂);集沉淀,取沉淀再重复溶解、沉淀、离心分离操作至乙热式恒温加热磁力搅拌器(河南省巩义市英峪予华醇液澄清无色为止。仪器厂);200B型高速药物粉碎机(山东青州市精沉淀以少量蒸馏水溶解,以Sevag试剂(氯仿/2010年1月6日收到正丁醇=4/1)去除杂蛋白,取上清液重复操作3第一作者简介:梁丹霞(1980),浙江天台人,助理研究员,硕士。次。收集清液,再加入三倍体积的95%乙醇进行醇*通信作者简介:顾霞敏(1981),浙江仙居人,讲师,硕士/研究析
6、,取沉淀用乙醚、丙酮反复洗涤,干燥,得产品为生.研究方向:天然产物的提取和分离.E-mai:lguxm@tzc.edu.cn。米糠粗多糖。13期梁丹霞,等:米糠多糖的提取及其含量的测定31952.2含量测定2.2.4显色条件的考察2.2.1葡萄糖储备液的制备3表1米糠多糖显色实验L9(3)设计方案表精密称取无水葡萄糖25mg,用蒸馏水溶解并ABC定容至100mL。水平6%苯酚/mL浓硫酸/mL反应时间/min2.2.2样品溶液的制备10.86.520精密称取米糠粗多糖25mg,用蒸馏水溶解并21.07.03
7、0定容至100mL。31.27.5402.2.3最佳吸收波长的测定表3显色实验正交结果取葡萄糖储备液4mL,用蒸馏水稀释至10mL,即为浓度为0.10mg/mL的标准溶液。样品溶液同ABC吸光度实验号6%苯酚/mL浓硫酸/mL时间/minAbs样稀释得0.10mg粗多糖/mL的溶液。10.86.520.00.067分别取上述稀释溶液1mL,置于10mL容量20.87.030.00.089瓶中,加入6%苯酚溶液1.0mL,混匀,冰浴条件30.87.540.00.108下再加入7.0mL硫酸,以蒸馏水补至刻度,混匀41
8、.06.530.00.08251.07.040.00.073后,反应30min。以蒸馏水替代样品溶液如上配61.07.520.00.111制空白对照液,在(600300)nm范围内扫描,71.26.540.00.06981.27.020.00.073结果见图1、图2。由两图确定最佳吸收波长为91.27.530.00.094490
