虫草多糖的分离纯化及含量测定

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5、备。作者用苯酚-硫酸法测定虫草多糖含量。1?材料1.1?供试材料虫草菌株(青海省);蒸馏水(双蒸水)、发酵液精多糖Ⅰ和菌丝体精多糖Ⅱ;葡萄糖标准溶液(100μg/mL)等。1.2?仪器及设备培养箱(常州市恒久仪器制造有限公司光照培养箱);高压蒸汽灭菌设备(鸡西辰丰医疗器械制造有限公司YXQ.L-75型立式压力蒸汽灭菌器);大容量离心机(北京时代北利离心机有限公司GTR10-2);紫外分光光度计(上海悦丰仪器仪表有限公司)等。1.3?培养基配方1.3.1?活化培养基(g/mL)?蔗糖溶液1.30%,葡萄糖溶液1.30%,蛋白胨0.01%,酵母粉0.065%,琼脂0.5%,KH2PO40.025

6、%,MgSO4·7H2O0.0125%,pH自然,培养温度27℃。1.3.2?发酵培养基(g/mL)?葡萄糖1.75%,蛋白胨0.02%,酵母粉0.0625%,KH2PO40.025%,MgSO4·7H2O0.0125%,pH自然,温度27℃。2?方法2.1?配制培养基和灭菌按体积向培养基中加入蒸馏水,加热煮沸,调节pH值至中性,趁热倒入容器中。高压蒸汽灭菌,温度121.9℃,时间20min。灭菌完成,趁热倒在平板上。2.2?活化菌种在无菌条件下,将冷冻完好的菌种接到培养基上,无光条件下27℃培养,培养菌丝洁白并生长旺盛且无杂菌后备用。2.3?配制发酵培养基及培养把培养基上的菌种快速接入到发

7、酵培养基中,在27℃条件下,无光培养192h。2.4?发酵液多糖的分离纯化2.4.1?发酵液及透析袋的处理?发酵液在4000r/min条件下离心20min,过滤得到上清液和沉淀(菌丝体)。将透析袋分成小段后,处理后在4℃条件下存放于冰箱保存待用。2.4.2?发酵液多糖的提取?醇沉:将无水乙醇以3倍体积加于发酵液中,离心后得上清液,4℃条件静置12h后,在4000r/min离心156--------------