资源描述：
《大蓟多糖提取分离及含量测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第27卷,第1期光谱实验室Vol.27,No.12010年1月ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryJanuary,2010①大蓟多糖提取分离及含量测定②吴彦魏和平(安庆师范学院生命科学系安徽省安庆市菱湖南路128号246011)摘要用水提2醇沉法从大蓟中提取多糖,脱脂、去蛋白,经冷冻干燥后得到粗多糖。通过苯酚2硫酸法测定糖的含量,粗多糖得率为6.5%。再采用DEAE2纤维素离子交换柱层析进一步分离纯化,得到5个次级组分DJ1,DJ2,DJ3,DJ4和DJ5。其中得率最高的是DJ2组分,为8.06‰。关键词大蓟;多糖;提取
2、;分离;离子交换柱层析中图分类号:O657.32文献标识码:B文章编号:100428138(2010)01200982041前言[1]大蓟为菊科管状花亚科菜蓟族蓟属植物(CirsiumjaponicumDC.)的干燥地上部分或根,我国各地均产。大蓟性凉,味甘、苦,归心、肝经。大蓟中含有多种化学成分:黄酮、生物碱、挥发油、谷[2][3—5]甾醇和糖类化合物等。药理实验表明,大蓟具有止血、降压、抑菌及抗肿瘤作用。临床上多用[6,7]于治疗肺结核、阑尾炎、乳腺炎、急性黄疽性肝炎。鉴于该属植物重要的药用价值,国内外学者对[8,9]该植物的化学成分及生理活性多有研究,但
3、据文献可知近年来对大蓟的黄酮成分研究较多,其多糖类成分却尚未见报道。本文提取、分离了大蓟多糖,为进一步开发大蓟的中药资源打下良好基础。2实验部分2.1材料与仪器2.1.1材料大蓟(安庆春源大药房,由安庆师范学院魏和平副教授鉴定)。2.1.2试剂二乙氨基乙基纤维素(DEAE2纤维素,北京恒业中远化工有限公司);乙醚、三氯醋酸、NaOH、95%乙醇、NaCl、苯酚、硫酸均为分析纯试剂。实验用水为蒸馏水。2.1.3仪器722型分光光度计(上海悦丰仪器仪表有限公司);Y500中药粉碎机(上海亿贝特粉碎机制造厂);RE252A型旋转蒸发仪(上海沪西分析仪器厂);Heto
4、UltraFreeze5410超低温冰箱(德国HetoHolten公司);FD21型冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司)。①安徽省教育厅自然科学重点研究项目(KJ2007A123ZC);安徽省高等学校青年教师科研资助项目(2005jq1115)②联系人,电话:(0556)5500766;手机:(0)13966440226;E2mail:sportman821@sina.com作者简介:吴彦(1973—),男,安徽省安庆市人,硕士,副教授,主要从事生物化学及植物活性成分研究工作。收稿日期:2009207230;接受日期:2009208218第1期吴彦等:大蓟
5、多糖提取分离及含量测定992.2实验方法[10]2.2.1大蓟粗多糖的提取大蓟用中药粉碎机粉碎成40—60目粉末备用,取50g放入1L的烧杯,加蒸馏水200mL,沸水煮2h,重复3次;将每次母液合并浓缩,用乙醚脱脂,然后用15%三氯醋酸在4℃下脱蛋白;离心,上清液用10%NaOH中和,流水透析2天;再浓缩,乙醇沉淀;收集沉淀,先-70℃预冻,然后放入冷冻干燥机冷冻干燥24h得黄褐色粉末状大蓟粗多糖。[11]2.2.2大蓟粗多糖离子交换柱层析分离取大蓟粗多糖3g,加入适量蒸馏水溶解,离心,上清液用DEAE2cellulose柱层析(30×5cm)进行分离。首先以
6、蒸馏水作为洗脱液,然后用0.4、0.8、1.2、2.0molöL的NaCl溶液洗脱,流速为0.8mLömin,20minö管,分别收集各馏分,测定波长490nm(苯酚2硫酸法)下的吸光度值。每种洗脱液收集一个组分,分别为:DJ1,DJ2,DJ3,DJ4和DJ5。3结果与讨论3.1校准曲线的绘制配制标准溶液:准确称取150℃干燥到恒重的葡萄糖标准样品20mg,在烧杯中加水溶解后置于500mL容量瓶中,稀释到刻度。配制苯酚溶液:取苯酚100g,加铝片0.2g和碳酸氢钠0.1g,蒸馏收集182℃时的馏分,称取此馏分10g,加水150mL,置于棕色瓶中。校准曲线的制作
7、图1葡萄糖溶液校准曲线:准确吸取标准品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL,分别置于具塞试管中,各加蒸馏水使总体积为2.0mL,再分别加苯酚试液1mL,摇匀,迅速滴加浓硫酸5.0mL,摇匀后放置10min,置沸水浴中加热15min,取出,冷却至室温。另在一试管中加蒸馏水2mL,加苯酚和硫酸,同上操作做空白对照。在分光光度仪上于490nm处测定吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制校准曲线(图1)。3.2大蓟粗多糖得率计算用葡萄糖标准品溶液作为对照样测定不同浓度葡萄糖溶液的吸光度,作出回归曲线,求出回归方程。y=0.0088x-0.
8、0156,r=0.9975。待测样品液
