粗叶悬钩子总生物碱不同部位对肝损伤的保护作用研究

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1、粗叶悬钩子总生物碱不同部位对肝损伤的保护作用研究作者：赵锦燕，吴志生，陈旺，洪振丰【摘要】　　目的研究粗叶悬钩子总生物碱的不同极性部位对小鼠急性肝损伤的影响。方法采用回流提取法提取粗叶悬钩子总生物碱，用不同极性溶剂萃取其不同极性部位；制备小鼠急性肝损伤模型，用粗叶悬钩子总生物碱不同极性部位干预，观察其对小鼠血清生化和组织病理学的影响。结果醋酸乙酯低剂量和正丁醇高剂量组均可以显著降低转氨酶的活性；正丁醇高剂量组可以显著提高SOD活性，醋酸乙酯组可以显著提高SOD活性并降低NO含量。结论粗叶悬钩子总生物碱醋酸乙酯和正

2、丁醇部位可以降低转氨酶活性，提高小鼠抗氧化能力。粗叶悬钩子总生物碱醋酸乙酯部位和正丁醇部位均有抗肝损伤活性，且醋酸乙酯部位优于正丁醇部位。【关键词】粗叶悬钩子；总生物碱；抗肝损伤10　　粗叶悬钩子为蔷薇科悬钩子属植物，根、叶均可入药，具有活血化淤、清热解毒之功效［1］，常用于治疗慢性肝炎、肝脾肿大、行军性血红蛋白尿、乳腺炎、外伤出血、口腔炎等疾病［2］。福建闽南安溪民间用于治疗各型肝炎。有关粗叶悬钩子总生物碱的不同极性部位防治肝损伤研究，目前尚未见报道，前期研究表明，粗叶悬钩子总生物碱有抗肝损伤的作用［3］，本研

3、究选用小鼠急性肝损伤模型，用粗叶悬钩子总生物碱的不同极性部位进行干预观察。　　1材料与仪器　　1.1药物与试剂粗叶悬钩子根部采自福建安溪，经福建中医学院药学系中药教研室鉴定为双子叶蔷薇科悬钩子属植物粗叶悬钩子Rubusal　ceaefoliusPoir.的根部。四氯化碳（CCl4），上海久亿化学试剂有限公司产品，批号GB688-92，分析纯；生理盐水注射液，福州福药制药有限公司产品，批号050103A07；AST，ALT，NO，SOD试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；粗叶悬钩子提取分离实验所需的各种化学试剂均

4、是AR级。　　1.2仪器AB204-N电子天平（梅特勒公司）；BT224半自动生化分析仪（意大利仪器）；FJ-2008PS放射免疫计数器（西安核仪器厂）；BH-2系统显微镜（OLYMPUS公司）；DRT-ZN型电热套（郑州长城科工贸有限公司）；低温冷却循环泵（郑州长城科工贸有限公司）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；旋转蒸发器RE-52（上海亚荣生化仪器厂）等。　　1.3动物健康昆明小鼠90只，体质量(20±2)g，雌雄各半，动物及饲料均由福建中医学院实验动物中心提供，置实验室适应环境31

5、0d后进行实验。　　2方法　　　2.1粗叶悬钩子总生物碱的提取［4］按照回流提取方法提取总生物碱，并做含量测定［5］。　　2.2总生物碱不同极性部位的提取分离分别取3g总生物碱，用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇各100ml，水浴回流1h，各提取3次，合并提取液，浓缩干燥后，分别得石油醚提取物0.01g，氯仿提取物0.01g，醋酸乙酯提取物0.1g，正丁醇提取物0.5g。由于石油醚和氯仿提取物量非常少，不足以作动物试验。　　2.3小鼠急性肝损伤模型制备及分组给药取小鼠90只，称重，按体重随机分为9组：即空白对照组、

6、CCl4模型组、总生物碱水溶液组、正丁醇高剂量组、正丁醇低剂量组、正丁醇药渣组、醋酸乙酯高剂量组、醋酸乙酯低剂量组、醋酸乙酯药渣组，每组10只，雌雄各半。除空白对照组腹腔注射0.2ml生理盐水外，其余各组于第1，4，7天在给药30min后，用0.2%CCl4花生油溶液按10ml/kg体重腹腔注射,即注射量为0.1ml/10g。空白对照组和CCl4模型组按0.1ml/10g体重予以生理盐水灌胃（即0.1ml/10g），总生物碱水溶液组（35mg/kg）、正丁醇高剂量组（35mg/kg）、正丁醇低剂量组(5.810m

7、g/kg)、正丁醇药渣组（35mg/kg）、醋酸乙酯高剂量组(35mg/kg)、醋酸乙酯低剂量组(4.6mg/kg)、醋酸乙酯药渣组（35mg/kg），0.25ml/10g，1次/d，连续7d。　　2.4取材全部小鼠于末次给药24h后取材，采用摘眼球法取血，每只小鼠取血约1ml装入EP管中，于4℃3000r/min离心10min，取其上清液，于-20℃保存待测；取血完毕后颈椎脱臼处死小鼠，立刻剖开腹腔，暴露肝脏，剪取小块右中央叶肝脏组织，约0.5cm3，迅速投入10%福尔马林溶液中固定，常规切片，HE染色，光镜下

8、作组织病理学检查。　　2.5指标检测各测定指标分别按相关的试剂盒操作说明书进行测试。肝组织病理学检查，在光镜下观察肝组织切片的病理形态学变化。肝组织病理学改变分为4级：(－)正常肝细胞，肝组织细胞无肿胀、坏死及炎性浸润；（＋）肝细胞轻度肿胀，单个肝细胞坏死，或少许炎性细胞浸润，或点状坏死，肝小叶内散在的肝细胞坏死，坏死范围仅累及1至几个肝细胞；（＋＋）肝细胞中度肿胀，表现