白首乌粗多糖对酒精性肝损伤的保护作用研究

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1、白首乌粗多糖对酒精性肝损伤的保护作用研究：杨小红，袁江，周远明，张瑜，曾亚翎，刘谋治，赵冰清【摘要】目的探讨白首乌（耳叶牛皮消CynanchumauriculatumRoyleexethodsInthisexperiment,roughpolysaccharidefromBaiShoualcontrolgroups,modelcontrolgroup,positivecontrolgroupandthreeexperimentgroups.Eachexperimentgrouphad14miceandg/(kg·d),middle

2、-dosageof250mg/(kg·d)andlog/(kg·d),evolumeofphysiologicalsaline.TheconcentrationoftheserumGPT/ALTandGOT/ASTeasuredbyextractingtheeyeballblood.ResultsTheactivityoftheserumGPT/ALTandGOT/ASTintheexperimentgroupdecreasedmoresignificantlythanthatinmodelcontrolgroup,andthed

3、ifferencesCynanchumauriculatumRoyleexice.　　KeyauriculatumRoyleexauriculatumRoyleex.)Hemsl和戟叶牛皮消CynanchumbungeiDee.的块根，具有养血益肝、固肾益精、乌须黑发和延年益寿的功效［1，2］。现代研究发现白首乌中含有多种有效成分，具有抗肿瘤、抗衰老和保肝等多方面的药理活性［1，3］。国外的研究也证实了这些药理活性［4～6］。　　1器材　　1.1药品与试剂　　白首乌购自江苏滨海，经湖南省药检所方石林教授鉴定为萝摩科植物耳叶牛皮消C

4、ynanchumauriculatumRoyleexWight，实验用酒精（AR），谷草转氨酶(ALT)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。谷丙转氨酶酶(AST)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。氯仿、丙酮、乙醚、正丁醇均为分析纯。护肝片为北京亚东生物制药有限公司生产。　　1.2仪器与设备　　电热恒温干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）202－3AB型；电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）DK－98-1A；真空旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）RE52－99；抽滤机（郑州长城科工贸有限公司）SHB－B95型；离心沉淀机（上海医用分

5、析仪器厂）LXT－II；分析天平（湘仪天平仪器厂）TG328B。　　1.3实验动物ICR小鼠(长沙市开福区实验动物科技服务部提供,动物合格证号：湘000468)。　　1.4实验数据处理软件　　实验数据均在LENOVO-patiblePC机Royleexl乙醇(85%),加热回流1h，过滤，滤渣于恒温箱中80℃干燥过夜［2］，得淡黄色滤渣52.5g。　　2.1.2初多糖的提取浸提　　将黄色滤渣52.5g均分于两个1000ml圆底烧瓶中,A瓶为26.2g，B瓶为26.3g。A、B瓶各加520ml水,在恒温水浴中回流1h，过滤，滤渣在相

6、同条件下重复浸提1次，合并滤液。　　离心：将两次浸液离心机离心10min(2500r/min)，合并滤液。　　减压浓缩：将合并滤液在真空旋转蒸发器中浓缩至75ml。　　真空干燥：在浓缩后的多糖溶液中加入3倍量95％乙醇（AR）225ml，抽滤，真空干燥后得淡黄色粗多糖。　　2.2粗多糖的纯化　　2.2.1脱蛋白　　粗多糖加蒸馏水200ml复溶后经过Sevag试剂(氯仿20ml，正丁醇4ml)除蛋白，连续操作4次,得150ml多糖溶液。　　2.2.2醇沉　　在脱蛋白后的多糖溶液中加入3倍95％乙醇，沉淀用乙醇洗涤3次，经抽滤、真空干

7、燥后得到浅灰色粉末状结晶。　　2.2.3纯化　　将灰白色结晶用乙醇、丙酮及乙醚反复洗涤，抽滤、真空干燥后得到浅灰色粉末状结晶。　　2.3多糖的验证　　2.3.1多糖检测反应　　取多糖粉末少许用蒸馏水溶解，取1ml于试管中，再加10%α-萘酚的乙醇溶液3滴，均匀混合，沿管壁加浓硫酸1ml，使集于下层，在两层交界面有棕色环出现，证明此为多糖。　　2.3.2水解　　取上述粉末20mg置锥形瓶内，加入2mol／L的硫酸甲醇溶液2ml，封口，置85℃水浴中水解24h，冷却，用饱和Ba(OH)2中和，离心，取上清液，减压浓缩至干，待用。　　2

8、.3.3单糖组分的纸色谱层析　　用微量点样器分别取样品水解液和标准葡萄糖液各4～5μl，在纸色谱上点样，置于展开筒中展开，展开系统为:正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5)上层,自然风干后用邻苯二甲酸苯胺显色，样品水解液出现4个棕色点，如图1，其中有一个点