化肝通络方对胆汁性肝硬化模型大鼠的抗纤维化作用及其机制研究-论文.pdf

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1、ji曩叠_曩叠爱≯薯譬毒薯善蓦爱誊鬟囊：化肝通络方对胆汁性肝硬化模型大鼠的抗纤维化作用及其机制研究宣信1,2田耀洲1,3曹鹏胡春萍蔡雪婷张伟。(1．南京中医药大学，江苏南京210023；2．解放军81医院，江苏南京210002；3．江苏省中医药研究院，江苏南京210028)摘要目的：探讨化肝通络方对胆汁性肝硬化模型大鼠的抗纤维化作用及其机制方法：大鼠随机分为假手术纽、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)纽和化肝通络方高、中、低剂量组．除假手术组外，其余各组大鼠均利用结扎大鼠胆总管方法制造胆汁淤积肝硬化模型。于造模后第2周

2、开始分别给药。给药4周后取大鼠血清测总胆红素(T—Bil)、直接胆红素(D—Bil)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等肝功能指标，取部分肝脏行HE染色观察肝脏病理形态变化，ELISA法测定血清仅一平滑肌肌动蛋白(—SMA)、金属蛋白酶组织抑制因子一1抗体(TIMP一1)、细胞间黏附分子(ICAM一1)的表达，免疫组化方法测定肝组织转化生长因子131(TGF一131)、信号传导蛋白3(Smad3)、Smad7的表达。结果：与假手术组相比，模型组大鼠T—Bil、D—Bil、AIJT、AST等肝功能指标均明显

3、升高，且血清中0l—SMA、TIMP一1、ICAM一1高表达。模型组大鼠肝脏出现炎性细胞活动及纤维组织增生等病理改变。化肝通络方各剂量组、UDCA组与模型组比较，各项肝纤维化指标均有明显下降，肝组织中TGF一131、Smad蛋白表达亦明显下降，Smad表达明显升高。结论：化肝通络方对胆汁性肝硬化模型大鼠具有明显的抗纤维化作用．其机制可能与TGF一13／smad信号通路有关。关键词胆汁性肝硬化化肝通络方肝功能肝纤维化指标病理学实验研究中图分类号R575．205文献标识码A文章编号1672—397X(2014)03—0

4、073—03胆汁性肝硬化分为继发性胆汁性肝硬化和原发性胆汁性ELISA测定试剂盒，R&DSystemsChina(LotNo295330)；抗肝硬化(primarybiliarycirrhosis，PBC)，前者由肝外胆管长TGF一131、Smad3、Smad7多克隆抗体，CellSignalingTechnology。期梗阻引起。PBC是一种慢性进展性自身免疫病，因肝内长1．2实验动物清沽级SD大鼠72只，全雄，体重(180-a：20)g，期、持续性的胆汁淤积，引起肝脏纤维化、肝硬化并最终导致购于南京青龙山动物繁

5、殖场．合格证号：SCXK(苏)2010-0001。肝衰竭，其起病隐匿，早期常常无明显症状，部分患者到已达1．3主要仪器全自动生化分析仪：日本日立公司；光学显肝功能失代偿期时才就诊，因而预后较差ll_21。药物治疗方面微镜：日本Olympus公司；自动放射免疫计数机：中国科学技熊去氧胆酸(UDCA)是目前公认的对PBC具有确实疗效的术大学中佳公司：台式高速冷冻离心机：Eppendorf首选治疗药物，但迄今尚无特异性药物，而UDCA也仅仅对centrifuge5417R，德国Eppendorf公司；电热恒温水槽：DK一

6、部分患者有效【31。田耀洲教授通过中医辨证论治研究总结了8D型，上海医用恒温设备厂；酶联免疫检测仪：Thermo公司。中药化肝通络方，治疗本病获得了较好的疗效。本研究拟对2实验方法化肝通络方的疗效进行科学评价，并探索其作用机制。2．1分组与造模取72只大鼠标号后，随机分为假手术组121实验材料只与造模组60只。大鼠予1O％水合氯醛溶液(300mg／kg)腹腔注1．1药品与试剂熊去氧胆酸(UDCA)．LosanPharma射麻醉后，沿腹正中线开腹．找到并暴露胆总管，假手术组仅分离GmbH生产；化肝通络方(药物组成：人

7、工牛黄O．1g、红花胆总管后关腹，造模组在肝门部胆管周围的近端结~L／l_n总管后，15g、五灵脂15g、余甘子30g、印度獐牙菜15g、肉豆蔻10g、黄常规关腹。术后连续3d注射青霉素40万单只，正常喂养[41。芪25g、木香10g、伞梗虎耳草15g、芫荽果10g、沉香3g、石榴将造模成功的60只胆汁性肝硬化模型大鼠随机分为模型子20g、烈香杜鹃8g、冬葵果15g、甘草10g)，由江苏省中西医组、熊去氧胆酸(UDCA，58．3mg·kg·d)组和化肝通络方高剂结合医院提供；血清仪一平滑肌肌动蛋白(—SMA)ELI

8、SA测量(4．36g·k·d-')、中剂量(2．18g·k·d-I)、低剂量(1．09g·kg-'·d-1)定试剂盒，BioSource公司(LOtNo20120709)：金属蛋白酶组组．每组12只．并于第8天开始各组大鼠按10mL／kg的体积灌织抑制因子一1抗体(TIMP一1)ELISA测定试剂盒．R&D胃相应药物，1次，d，共7d。假手术组及模型组给等体