芪蚣抗纤方抗免疫损伤性大鼠肝纤维化的分子机制研究.pdf

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1、LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2013VOL．24NO．10时珍国医国药2013年第24卷第10期芪蚣抗纤方抗免疫损伤性大鼠肝纤维化的分子机制研究彭丹凤，陈桂敏(海南医学院中医学院，海南海口571101)摘要：目的观察芪蚣抗纤方(QF)对免疫损伤性肝纤维化大鼠肝组织q-TGF一131、smad2、smad3蛋白表达以及TGF一131mRNA阳性表达的影响，探讨QF治疗大鼠免疫损伤性肝纤维化的分子机制。方法采用猪血清腹腔攻击法制备免疫损伤性肝纤维化大鼠模型。通过免疫组化半定量法观察肝组织TGF—pl、smad2、smad3

2、蛋白表达；PT—PCR法提取总RNA，电泳仪观察TGF一131mRNA阳性表达。结果免疫组化学染色显示：模型组大鼠肝组织TGF～B1胞浆强阳性表达，Smad2棕色阳性着色由胞浆转至胞核。QF干预组大鼠肝组织TGF一131、Smad2、Smad3蛋白表达下调(P<0．01)。一PCR结果显示：伴随着肝纤维化的形成，TGF一131mRNA阳性表达有明显增强趋势，经过治疗后TGF一131mRNA阳性表达明显减弱。结论QF能有效干预免疫损伤性大鼠肝纤维化的形成，其分子机制可能是：通过调节TGF一131／Smads信号通路发挥抗肝纤维化作用，通过下调TGF一131mRNA的表达从而

3、减少胶原纤维合成及沉积发挥抗纤维化作用。关键词：芪蚣抗纤方；肝纤维化；TGF一131、smad2、smad3蛋白表达；TGF一131mRNA阳性表达D0I标识：doi：10．3969／．issn．1008-0805．2013．10．037中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1008-0805(2013)10-2403-02肝纤维化的预防与治疗一直是国内外的热点研究领域，近年1．4造模方法除正常对照组外，其余3组均用猪血清腹腔攻击来中医药在肝纤维化防治研究方面取得了一定的进展，但大多数法(2次／周，0，5ml／只)诱发肝纤维化，攻击8周。研究仍局限于动物实验或初

4、步临床观察，有关中药抗肝纤维化的1．5给药第5周开始灌胃给药，正常对照组与模型组给生理盐分子机制缺乏系统的研究。我们进行的前期实验，已证实芪蚣抗水2ml／100g体质量，QF干预组给中药(生药含量lg／ml，大剂量纤方(QigongKangxianprescription，QF)及拆方有明显的抗肝纤维组2ml／200g体质量，小剂量组1ml／200g体质量)灌胃，1次／d，4化作用，本文旨在通过观察芪蚣抗纤方(QF)对大鼠免疫损伤性周。实验共计8周。肝纤维化形成过程中肝组织TGF—pl、smad2、smad3蛋白表达以1．6标本采集与处理实验过程中尾静脉采血，实验结束第2

5、及TGF—plmRNA阳性表达的影响，从细胞及分子水平探讨芪天，大鼠麻醉，断头取血，分离血清，一20％保存备用；于肝左叶取蚣抗纤方抗免疫损伤性大鼠肝纤维化的作用及可能的分子机制。肝组织，制备免疫组化光镜标本，剩余肝组织液氮速冻，一70℃冰1材料与方法箱保存以备提取总RNA。1．1动物雄性sD成年健康大鼠4O只，体质量(180±20)g，购1．7检测指标和方法免疫组化半定量法检测肝组织TGF一131、自广州中医药大学实验动物中心，SPF级。许可证号：SCXK(粤)smad2、smad3蛋白表达；PT—PCR法定性检测肝组织TGF—B12008一oo20。mRNA阳性表达。1

6、．2主要药品及试剂芪蚣抗纤方(QF)，由黄芪、蜈蚣、山慈1．8统计学处理所有数据均使用SPSS13．0软件包进行统计学姑、三七、白术等组成，由河北北方学院第一附属医院制剂室惠分析。计量资料以±s表示，组间比较使用检验，计数资料用赠。按标准工艺制成颗粒剂备用，每袋10g，用时配成液体灌胃，PEMS3．1软件分析，比较用检验。生药含量1g／m1)。猪血清：新鲜猪血购自海口琼山区肉联厂，自2实验结果提血清，分装灭菌一20℃冰箱保存备用。免疫组化试剂盒：TGF2．1免疫组织化学染色参照sP试剂盒说明书进行，阳性细胞—B1抗体(批号：BA0290)、smad2、3(批号：BA139

7、6)；配套用稀着色为棕黄色颗粒(表1)。释液(1：100)批号：(SA1022)；DAB显色剂以上试剂均购自武表1各组大鼠肝组织TGF—pl、smad2、smad3汉博士德生物工程公司。TGF一131购自上海亚培生物制剂有限mRNA胞浆阳性表达情况(i±s)公司。(批号：E0124r)。PCR试剂盒：PT—PCRonestepkit(AMV)(批号：DR024A)，USA。1．3动物分组大鼠在适应性喂养1周后，按体质量编号，查随机数字表，随机分为4组，正常对照组、模型组、QF大剂量干预组、QF小剂量干预组，每组10只。与正常对