肝宝胶囊抗免疫性肝纤维化及其机制的研究-论文.pdf

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1、122中药药理与临床2014；30(1)肝宝胶囊抗免疫性肝纤维化及其机制的研究廖应养，石莹莹，石依坤，王利平。，肖英，林青，谭正怀一(云南中医学院中药学院，昆明650500；四川省中医药科学院，成都610041)摘要目的：探讨肝宝胶囊对免疫性肝纤维化小鼠的治疗作用及机制。方法：选用全雌Balb／e小鼠，随机分为对照组、模型组、肝宝胶囊1．25、2．5、5g生药／kg、双环醇0．1g／kg，正常组小鼠尾静脉注射等体积无菌生理盐水溶液，其他各组尾静脉注射co—nA13mg／kg造模，每周一次，连续7周；造模的同时分别灌胃药物或0．5％

2、CMC—Na，每天一次，连续7周。末次给药后24小时，取肝脏、脾脏称湿重并计算其脏器指数，取血测定ALIT等生化指标，取肝脏测定其羟脯氨酸、胶原堆积、IX-SMA表达以及IL．10等细胞因子水平。结果：小鼠在注射CortA13mg／kg7周后，其血清ALT、AST活性及TP、GLB、LN含量明显升高，A／G、ALB明显降低，肝脏指数和脾脏指数显著增加，肝脏组织羟脯氨酸(Hyp)、胶原堆积及IX—SMA表达明显增加，肝脏IL-1O、IL一12．p70含量升高，而其IL-13、IL4的含量降低，与对照组比较差异有统计学意义。肝宝胶囊1

3、．25g生药／可显著降低ConA小鼠血清Au活性及GLB水平，升高其血清ALB水平及A／G比值，降低其肝脏羟脯氨酸含量及胶原堆积，显著降低小鼠肝脏组织的IL一10、IL一12p70、IL．13、TNF、MCP-1以及MIP含量。肝宝胶囊2．5g生药／kg可显著降低ConA小鼠血清A【活性、GLB和LN水平，升高其血清ALB水平及A／G比值，降低其肝脏羟脯氨酸含量及胶原堆积，减少IX．SMA表达，显著降低小鼠肝脏组织的IL．12pT0、IL．13、TNFa、MCP．1以及MIP含量。肝宝胶囊5．0g生药／kg可显著降低ConA小鼠血

4、清AL1’活性、GLB和LN水平，升高其血清ALB水平及A／G比值，降低其肝脏羟脯氨酸含量及胶原堆积，减少IX·SMA表达，显著降低小鼠肝脏组织的IL．12p70、IL．13、TNF仅、McP-1、MIP以及TGF~I含量。结论：上述研究结果表明肝宝胶囊防治ConA诱导小鼠的肝纤维化可能与其能够显著抑制和肝纤维化各阶段有关的细胞因子表达有关，而其抑制IL-10表达的作用，提示该药可能对病毒引起的慢性肝炎及肝纤维化有较好的疗效，其详细作用机理还有待进一步深入研究。关键词肝宝胶囊；免疫性肝纤维化；刀豆素A；细胞因子；小鼠肝纤维化是肝脏

5、受到持续慢性损伤时，细胞外基质(extra．对湿度52％左右，照明12h明亮，12h黑暗。饲料为四川省中eellularmatrix，ECM)可逆性沉积的创伤愈合过程”’，是各种医药科学院实验动物中心提供的全价颗粒饲料。慢性肝病向肝硬化发展所共有的病理改变和必经途径，目前无1．3试剂刀豆素A(ConA)：规格为100mg／支，批号为有效治疗药物。其中，免疫性因素在病毒性肝纤维化的进程中06510227，购自Sigma公司。临用前用无菌生理盐水配制成所起着非常重要的作用，肝宝胶囊由黄芩和五味子组成，本实验需浓度的溶液备用。蛋白酶抑制

6、剂ProteaseInhibitorCocktail室前期研究显示该药物组合物对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的SetⅢ，EDTA．Free。1ml，Cat．No．539134Rev．27．February-2012肝纤维化大鼠具有显著的防治作用，且对刀豆蛋白A(ConA)诱RFH，MerckKGaA，Darmstadt，Germany；三羟甲基氨基甲烷导的急性免疫性肝损伤具有较好的保护作用(相关资料待发(Tris)，分子量121．14，Cat群O60，1250ce，BeijingSolarbioSei—表)。为评价肝宝胶囊预防免疫性

7、肝纤维化的作用及其相关作ence&TechnologyCo．Ltd；脱氧胆酸钠(Sodiumdeoxycholate)，用机制，本实验选用多次注射ConA诱导小鼠免疫性肝纤维化A43035-2E(302-95-4)，分子量414．55，LotNo．107235，FARCO模型进行相关研究。现将相关研究结果报道如下：chemicalsupplies；壬基酚聚氧乙烯醚(NP-40)，规格25IIl，批号B1210036，AladdinchemistryCo．1td；谷丙转氨酶(ALT)检测试剂1材料与方法盒，批号为2013007；谷草

8、转氨酶(AST)检测试剂盒，批号为2012024；白蛋白(ALB)检测试剂盒，批号为2013001；总蛋白1．1试验药物肝宝胶囊，由黄芩提取物和五味子提取物组(1P)检测试剂盒，批号为22013006，均为长春汇力生物技术有成，相关配伍比例按专利c