可注射组织工程肝改善大鼠肝纤维化的作用及其机制-论文.pdf

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1、临床军医杂志2014年1月第42卷第1期ClinJMedOffic，Vo1．42，No．1，January，2014·论著(应用基础研究)·可注射组织工程肝改善大鼠肝纤维化的作用及其机制周海洋，郑爱民，高卓，黄蓉蓉，张海宏，曹厚军(解放军空军总医院普通外科，北京100700)摘要：目的探讨可注射工程化肝组织抗肝纤维化作用及其机制。方法制作大鼠肝纤维化模型，采用新生大鼠肝细胞、液态鼠尾胶原复合物行肝纤维化大鼠肝包膜下多点注射，20d后计算大鼠生存率、行腹部超声检查、取肝脏观察大体及镜下变化并检测肝组织TGF—B的表达，观察肝脏原位多点注射工程化肝组织对大鼠肝纤维化的影响。结果实验组

2、大鼠镜下及超声检查提示肝纤维化缓解，TGF—B表达明显下降。结论原位多点注射基于新生大鼠肝细胞构建的工程化肝组织能缓解肝纤维化，机制可能与其显著抑制TGF-B的表达有关。关键词：肝纤维化；肝组织工程；新生大鼠肝细胞；转化生长因子一口中图分类号：R575．2文献标志码：Aldoi：10．3969／j．issn．1671_3826．2014．01．01J文章编号：16713826(2014)01-0001-04EfectoflivertissueengineeringonliverfibrosisinratsanditsprobablemolecularmechanismZhouHa

3、iyang，ZhengAimin，GaoZhuo，HuangRongrong，ZhangHaihong，CaoHoujun(DepartmentofGeneralSurgery，AirForceGeneralHospital，PLA，Beijing100700，China)Abstract：ObjectiveTostudythetreatmentoftheinjectabletissueengineeredliverforhepaticfibrosisanditsmechanism．MethodsAfterinjectionofengineeredlivertissueonliv

4、erfibrosisrats，thefunctionwasobservedbysurvival，abdominalultrasound，HEstaining，andimmunohistochemicalassayoftransforminggrowthfactor—p(TGF—p)expressionintheliver．ResultsThesurvivalrateofratsincreased．HEstaininganduhrasoundexaminationsshowedremissionofliverfibrosis．TGF一8expressionwassignifi·ca

5、ntlydecreased．ConclusionIncaseofmulti—pointinjectioninsitu，tissueengineeringliverbasedonneonat~rathepatocyteshelpstorelieveliverfibrosis，andthemechanismmayberelatedtosignificantinhibitionofTGF—Bexpression．Keywords：liverfibrosis；livertissueengineering；neon~ratlivercell；transforminggrowthfactor

6、—B肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的必量，对15只雌性SD大鼠进行交替双侧大腿内侧经阶段⋯。既往肝纤维化及其终末期肝硬化的治腹股沟区皮下注射，注射过程中避免注入血管，每疗方法以纠正肝损害、中医药以及肝移植等为主，周注射2次，同时全程使用5％乙醇作饮料喂养，而确切有效的肝移植治疗存在供体稀缺、费用高持续8周。昂等困难，组织工程方法的应用给肝纤维化的治1．3分离种子细胞及制备凝胶复合物种子细疗提供了新的思路。在前期实验的基础上，我院胞分离：将新生大鼠浸泡于75％乙醇中消毒5min，以新生大鼠肝细胞做为种子细胞，鼠尾胶原为支无菌操作下逐层开腹，完整摘取肝脏，均匀剪碎至架，构建了工程

7、化类肝组织前体，利用肝脏的原大约0．5mm小块。肝细胞专用培养基和0．25％位，采用多点注射的方法植人肝硬化大鼠体内，对胰酶1：1体积混匀后消化小块肝组织，使用适量肝纤维化的改善，取得了初步疗效。双蒸水破坏红细胞，12S后使用10×PBS终止破1材料与方法红，过筛去除杂质。鼠尾胶原制备：无菌条件下取1．1动物雄性SD大鼠(出生24h以内)；用雌成年SD大鼠尾腱10根，浸入0．1％醋酸300ml，性sD大鼠(体质量150g左右)15只进行纤维化4℃放置48h，期间定时摇晃。500g