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1、复方鳖甲软肝片抑制大鼠酒精性肝纤维化作用机制研究论文.freelaleratsodel,poundBiejiaranganTrocheandAnfatetreatmentgroups.Alcoholhepaticfibrosismodelixtureof“alcohol-Pyrazole-coiloil”andhigh-fatdietforsixteenodelratsal,ofpoundBiejiaranganTrochegroupandAnfategroupparedodelgroup,andexpressionofTGF-β1decreasedi
2、npoundBiejiaranganTrochegroupparedg/(kg·d)、玉米油2mL/(kg·d)的混合液,灌胃16周。在灌胃白酒混合物的同时饲喂高脂饲料(基础饲料-胆固醇-猪大油＝79∶1∶20)。正常组每日用生理盐水灌胃,普通饲料喂养。2.2给药中药组灌胃鳖甲软肝片,给药量0.54g/(kg·d),西药组灌胃安珐特,给药量21.6mg/(kg·d),2组均相当于人临床用量的5.4倍,均治疗4周。正常组及模型组每日灌胃2mL生理盐水。2.3观测指标造模16周后,正常组和模型组大鼠尾静脉采血,分离血清,用放免分析法测定血清中HA、LN及C
3、Ⅳ含量。治疗4周后,正常组、模型组、中药组和西药组大鼠尾静脉采血,分离血清,测定血清中HA、LN及CⅣ含量。治疗4周后,取各组大鼠肝组织,常规石蜡包埋、切片、HE染色、光镜观察,TGF-β1免疫组化染色实验也采用该套石蜡块。3统计学方法应用SPSS13.0软件包进行统计分析。计量资料用x±s表示,2组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,各组间两两比较采用LSD检验。4结果4.1用药前后大鼠血清中透明质酸、IV型胶原及层粘连蛋白检测结果(见表1、表2)表1用药前2组大鼠血清中HA、LN和CⅣ含量比较(略)注：与正常组比较,*P＜0.05表2用药后各
4、组大鼠血清中HA、LN和CIV含量比较(略)注：与正常组比较,**P＜0.01；与模型组比较,▲▲P＜0.014.2大鼠肝组织转化生长因子-β1蛋白表达免疫组化染色结果本实验采用免疫组织化学染色方法检测了正常组、模型组、中药组及西药组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白的表达情况,结果显示,正常组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白仅有少数散在肝细胞阳性表达；模型组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白肝细胞弥漫强阳性表达；中药组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白部分肝细胞阳性表达；西药组中央静脉周围及肝小叶内较多肝细胞阳性表达。大鼠TGF-β1肝组织免疫组化染色结果初步显示,复方鳖
5、甲软肝片和安珐特均能显著下调大鼠肝组织中TGF-β1蛋白含量,且复方鳖甲软肝片优于安珐特。结果见图1。4.3大鼠肝组织石蜡切片Mallory染色光镜观察结果肝组织中的胶原经Mallory染色,光镜下呈蓝色。正常组大鼠肝组织中仅有少量胶原表达,肝细胞及汇管区、中央静脉及窦周围几乎不见胶原纤维；模型组大鼠肝组织内胶原水平显著提高,中央静脉及汇管区轻度纤维化；中药组及西药组大鼠肝血窦周围胶原明显减少,相邻血窦间的纤维联络基本消失。Mallory染色初步表明,复方鳖甲软肝片在降低肝组织胶原含量上疗效接近安珐特。5讨论目前,肝纤维化的血清标志物主要有HA、LN、
6、CⅣ。HA是一种广泛存在于细胞外基质(ECM)中的高分子多糖,肝纤维化时肝星状细胞(HSC)合成HA增加,而肝内皮细胞对HA降解能力下降,导致血清中HA水平明显增高,其增高程度与肝组织炎症和纤维化程度呈正相关,可作为抗肝纤维化药物治疗动态观察指标。LN是一种糖蛋白,主要存在于基底膜,反映基底膜的更新率。LN在肝组织中含量甚微,当肝窦毛细血管化和汇管区纤维化时,星状细胞大量分泌LN和CⅣ,随着肝纤维化进展而合成增加,血清中LN明显增高。CⅣ在肝内合成和代谢,在肝纤维化发展过程中,肝组织CIV过量合成,出现肝窦毛细血管化,使血液中CⅣ异常增加,可能是最早增
7、生的纤维,CⅣ被认为是反映胶原蛋白生成出现最早的重要指标。LN及CⅣ是血管胆管基底膜骨架的主要胶原成分,肝窦内无明显沉着2-3。近年来研究发现,在众多细胞因子中,TGF-β1是最为重要的致纤维化因子。TGF-β1对肝纤维化发生具有特别重要的病理生理学意义。TGF-β1产生时均以非活性状态存在,与相应受体无结合活性。肝受损时,肝内的炎细胞、星状细胞(HSC)、枯否细胞等自分泌或旁分泌非活性TGF-β1,非活性TGF-β1被炎症环境中的各种酶和细胞因子激活,刺激上述细胞进一步产生TGF-β1,形成逐级放大效应,导致TGF-β1大量生成和激活。TGF-β1在
8、肝纤维化中的作用具体表现在：①TGF-β1启动和维持肝HSC的活化,促进其增殖；②促进HSC等
