siRNA干扰cFLIP表达治疗肝癌的实验研究-论文.pdf

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1、第23卷第33期中国现代医学杂志Vo1．23No_332013年11月ChinaJournalofModemMedicineNOV．2013文章编号：1005—8982(2013)33—0006—05·论著·siRNA干扰cFLIP表达治疗肝癌的实验研究郭嘉，张阳德，何剪太，曹继华(中南大学肝胆肠外科研究中心，湖南长沙410008)摘要：目的探讨细胞型自杀相关因子(Fas)相关死亡域样白介素一1p转换酶抑制蛋白(c—FLIP)siRNA对肝癌细胞系HepG2生长、凋亡的作用。方法设计合成cFLIP

2、AsiRNA，按不同浓度转染肝癌HepG2细胞，另设置空白对照组、脂质体转染组、siRNA转染组，采用台盼蓝拒染法计数活细胞绘制细胞生长曲线，免疫组化链霉素抗生素过氧化物酶(sP)法检测细胞cFLIP蛋白和Ki67抗原表达、噻唑蓝法测定细胞增殖抑制率、流式细胞仪分析细胞凋亡情况。结果cLIPsiRNA转染HepG2细胞后，各siRNA组HepG2细胞生长受到抑制。随着siRNA浓度的增加，细胞增殖抑制率逐渐升高、cFLIP蛋白和Ki67抗原表达逐渐下降，而细胞凋亡率逐渐升高，与其他各组比较。差异有

3、显著性(P<0．05)。而其余各组之间上述指标比较，差异无显著性(P>0．05)。结论cFLIPsiRNA能有效地干扰肝癌HepG2细胞cFLIP基因表达，并可抑制癌细胞生长增殖，促进其凋亡。并且存在量效关系，有望成为治疗肝癌的基因药物。关键词：肝癌；c—FLIP；细胞凋亡；免疫组织化学；siRNA中图分类号：R735．7文献标识码：AInterferenceofe-FLIPbysiRNAinHepatocarcinomacelllineHepG2GUOJia，ZHANGYang-de，HEJia

4、n-tai，CAOJi—hua(NationalHepatobiliaryandEntericSurgeryResearchCeriter,CentralSouthUniversity,Changsha,Hunan410008,P．R．China)Abstract：【Obectjve】TostudytheeffectsofcellularFas—associateddeathdomain—likeIL一1betaconvertingenzymeinhibitoryprotein(cFLIP)siR

5、NAonthegrowthandapoptosisofHepat0carcinomacelllineHepG2．【Methods】SynthesizedsiRNAoftargetcFLIPwastransfectedtoHepatocarcinomacelllineHepG2atdifferentconcentration．Controlgroup，liposomegroup，negativesiRNAgroupweresetforcomparison．Livingceilswerecounted

6、bytrypanbluemethodtodrawcellulargrowthcurve．Immun0histochemistry(SP)techniquewasalsousedtoobservetheexpressionofcFLIPandKi67antigeninthetransfectedtumorcells．MTFandnOWeytometricwereusedtoanalyzethecellgrowthinhibitionrateandapoptosisrate．【Results】Afte

7、rtreatedwithcFLIPsiRNA，thegrowthandcaryocinesisofHepG2cellswereinhibitedsignificantly，especiallyin151xg／mLsiRNAgroup．WiththeincreasingofsiRNAeentration，theexpressionofcFLIPandKi67antigenwasfall—of．TheapoptosisrateofHepG2cellswasinereased．Statistically

8、significantdifiereneewerefbundcomparedwiththeothergroupsfP0．05)．【Conclusions】ThecFLIPsiRNAcouldeffectivelyinhibittheexpressionofcFLIPgene