siRNA对猪肝细胞THRSP基因mRNA表达的干扰效率-论文.pdf

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1、安徽农业大学学报，2014，41(3)：363-366JournalofAnhuiAgriculturalUniversity[DOI】10．136100．cnki．1672．352x．20140423．014网络出版时间：2014—4—2315：03：00[URL]http：／／www．cnki．net／kcms／doi／10．136100．cnki．1672—352x．20140423．014．htmlsiRNA对猪肝细胞THRSP基因mRNA表达的干扰效率潘中婷，王学故，陈宏权，，焦明慧，谢亚男，周梅，陈公伟，马帮军(1．安徽农业大学动

2、物科技学院，合肥230036；2．安徽地方畜禽遗传资源保护与生物育种省级实验室，合肥230036)摘要：应用改良的剪切消化法(1％IV型胶原酶)消化分离仔猪肝脏细胞，建立稳定的仔猪肝脏细胞的分离与原代培养体系；通过siRNA途径及RT-PCR技术检测肝细胞THRSP基因mRNA表达水平。结果表明，平均每g肝脏可获得6．2×10个细胞，接种即时存活率达94．84％，培养存活率达50％左右，细胞转染后细胞存活率达80％以上；设计合成的siRNA的干扰效率为75．3％关键词：猪；肝脏细胞原代培养；siRNA；THRSP基因；mRNA中图分类号：$8

3、28．2文献标识码：A文章编号：1672—352X(2014)03—0363—04InterferedeficiencyofsiRNAonmRNAexpressionofTHRSPgeneinpiglivercellsPANZhongting，WANGXuegu，CHENHongquan1一JIAOMinghui，，XIEYanan，ZHOUMei，CHENGongwei，MABangjun(I．SchoolofAnimalScienceandTechnology,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036

4、；2．AnhuiProvincialLaboratoryforLocalLivestockandPoultryGeneticResourceConservationandBio—breeding，Hefei230036)Abstract：Inthisstudy,digestingandseparatingpigletslivercellsobtainedfrommodifiedsheardigestionfl％IVcollagenase)wereculturedanddynamicallyobservedwithinvertedmicrosc

5、opy,SOastoestablishastablesystemforprimarycultureofpiglets1ivercells．RNAiandI1_PCRtechniquewereemployedtothedetectionofthecellmRNAexpressionleve1．andthenthechangesofmRNAexpressionatthecellular1eve1wereex-plored．Theresultsshowedthat6．2x10。cellscanbeobfainedfrompergramofliver

6、ontheaverage，withseedingsurvivalrateof94．84％andtheculturesurvivalrateofabout50％，andtransfectedcel1viabilitywasmorethan80％．Theinterferede伍ciencyofchemosyntheticsiIAwas75．3％．Keywords：pig；1ivercellsinprimaryculture；siIA：刀豫5Pgene；mRNA1981年Seelig[1J在研究甲状腺激素作用及其与程【5]，在机体脂肪代谢调控中起重

7、要作用。但对猪饮食在调节基因表达中相互作用的分子机制时，从THRSP基因的mRNA表达调控的相关研究报道却小鼠肝脏中提取的mRNA中发现甲状腺激素应答甚少。spot14(thyroidhormoneresponsivespot14，THRSP)开展肝脏细胞分离、体外培养是简化及分析基因。该基因在哺乳类动物中主要在脂肪生成组织THRSP基因在肝脏细胞表达水平的有效方法之一；如肝脏、脂肪和乳腺组织内高度表达L2J，且与肥胖且在实验室条件下建立体外培养细胞模型，具有较症紧密相关J。现已证实THRSP基因作为一种甲状好的体外实验重现性。以其作为研究工

8、具，可在细腺素受体正调控或负调控激活转录因子，在组织特胞水平上提供吸收、代谢、转运等综合信息，为深异的脂类代谢调控中起重要作用；它能够有效调节入研究此类问题提供了条