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1、1题名HPV16E6小干扰RNA与宫颈癌细胞中E6p53p21关系的研究 作者官立丽;彭芝兰;牛晓宇; 中文摘要目的探讨HPV16E6小干扰RNA(siRNA)与宫颈癌CaSki细胞中E6、p53、p21之间的关系。方法2004年9月至2005年3月于四川大学华西第二医院,应用化学合成针对HPV16E6的siRNA借脂质体转染CaSki细胞,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测E6siRNA转染前后细胞中HPV16E6、p53、p21mRNA及其蛋白表达的变化。结果转染24h,E6mRNA的表达显著
2、低于空白组(P<0.05)。各时间点p53、p21mRNA的表达差异无显著性意义(P>0.05)。转染48h,E6蛋白表达明显下调,p53、p21蛋白表达相应升高。结论HPV16E6siRNA能特异、高效地沉默宫颈癌细胞E6mRNA的表达,减少对野生型p53的降解,恢复p53蛋白的功能活性。RNA干扰(RNAi)技术可为HPV感染相关性疾病提供一种新的特异性基因治疗方法。 刊名中国实用妇科与产科杂志 年2007 期07 2题名利用RNA干扰抑制CXCR4基因表达对乳腺癌细胞转移和侵袭能力的影响 作者张树成;乔雷;高
3、红; 中文摘要目的探讨抑制趋化因子受体CXCR4基因对乳腺癌细胞转移和侵袭能力的影响。方法将人乳腺癌细胞株MDA-MB-231分为未干扰组、CXCR4干扰组、β-actin干扰组和空白载体干扰组。设计并合成了针对CXCR4基因的发夹式siRNA模板,体外合成siRNA表达框架(siRNAexpressioncassettes,SECs),经脂质体转染CXCR4干扰组细胞,采用Westernblot免疫印迹法和逆转录聚合酶链反应检测各组的抑制效果,用BiocoatMatrigel侵袭能力检测仪检测MDA-MB-231细胞的转移侵袭能力。
4、结果SECs在mRNA水平和蛋白水平均明显抑制CXCR4基因的表达。CXCR4表达被抑制后,癌细胞侵袭能力受到明显抑制,与未干扰组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SECs可以高效特异地抑制人乳腺癌细胞中CX-CR4基因的表达。CXCR4基因高表达与乳腺癌细胞的转移密切相关,抑制细胞中CXCR4的表达可以抑制乳腺癌细胞转移和侵袭能力。图2参13。 刊名医学信息.手术学分册 年2007 期04 3题名RNA干扰技术抑制成骨细胞核激活因子受体配体基因对破骨细胞生成的影响 作者高坤;镐英杰;张晖;裴福兴; 中文
5、摘要目的:利用RNA干扰技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(LigandofreceptoractivatorofNF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)比值变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法:实验于2006-05/10在四川大学华西医院移植免疫实验室(国家重点实验室)完成。①实验材料:体外化学合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),用Lipofectin2000TM转染成骨细胞。②实验方法:采用荧
6、光实时定量聚合酶链反应检测RANKLmRNA的表达,筛选出最有效的干扰序列。③实验分组:分为最有效的siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组,每组设5个平行样本。采用免疫组织化学染色检测成骨细胞中RANKL、OPG蛋白的表达,观察RANKL/OPG比值变化。④实验评估:采用成骨细胞、破骨细胞共培养技术观察以上3组转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响。结果:①4种siRNA敲除RANKL基因后mRNA的表达:4种siRNA转染成骨细胞后,相对空白对照组,siRNA4分子对RANKLmRNA的抑制作用最为明显,达到89%。siRNA1,s
7、iRNA3对RANKLmRNA的抑制作用大于50%,而siRNA2对RANKLmRNA的也有相当的抑制作用。②各组成骨细胞中RANKL和OPG蛋白水平:RANKL和OPG的阳性表达均显示为棕黄色颗粒,RANKL主要分布于成骨细胞的胞浆和胞膜,OPG主要分布于成骨细胞的胞浆。siRNA4转染组RANKL表达(平均积分光密度值)低于空白对照组(分别为3.05±2.17,11.31±1.26),差异有显著性意义(P<0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P>0.05)。siRNA4转染组、阴性对照组OPG表达与空白对照组比
8、较,差异均无显著性意义(P>0.05)siRNA4转染组RANKL/OPG比值低于空白对照组(分别为0.12±0.03,0.45±0.04),差异有显著性意义(P<0.01)。③转染的成骨细胞对破骨细胞生成的影响:各组共
