瞬时表达靶向tmv外壳蛋白基因的sirna能干扰病毒侵染

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1、维普资讯http://www.cqvip.com植物病理学报ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA36(1)：35-40(2006)瞬时表达靶向TMV外壳蛋白基因的siRNA能干扰病毒侵染赵明敏，安德荣，黄广华，何祖华。，陈江野(’西北农林科技大学植物保护学院，杨凌712100；中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室，上海200031；。中国科学院上海生命科学院植物生理生态研究所植物分子遗传国家重点实验室，上海200032)摘要：RNA干扰(RNAinterferen

2、ce，RNAi)是与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA导入细胞后，该mRNA发生特异性降解，从而导致该基因表达沉默的现象。小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)作为RNAi途径的重要中介，已被广泛应用于动、植物抗病毒治疗研究。本文以烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)外壳蛋白基因为靶位，设计合成表达小干扰RNA的寡核苷酸，亚克隆到植物双元表达载体pBI121中，直接转化根癌农杆菌。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法，研究了同源于TMV外壳蛋白的siRNA对TM

3、V侵染的干扰作用。结果表明，瞬时表达的siRNA能够特异性干扰TMV侵染。含有重组表达载体pBI121／siRNA的根癌农杆菌渗入普通烟植株，在TMV接种后14d其上部叶片没有表现典型的花叶症状。对这些叶片进行Northern杂交试验也没有检测到TMV病毒的RNA积累或仅有很少量的积累。在枯斑寄主心叶烟上，siRNA的瞬时表达可使TMV侵染后的枯斑数明显减少，甚至不产生枯斑。此外，同源于TMV外壳蛋白的siRNA瞬时表达对非同源的黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus，CMV)没有抑制作用，表明siRN

4、A的干扰作用具有高度的同源依赖性。关键词：根癌农杆菌；烟草花叶病毒；外壳蛋白；siRNA；干扰TransientlyexpressedsiRNAstargetingcoatproteingeneofTobaccomosaicvirusinterfereswiththevirusinfectionZHAOMingminANDerong，HUANGGuanghuaz，，HEZu—hua，CHENJiang—ye(’CollegeofPlantProtection，NorthwestScienceandTechnology

5、UniversityofAgricultureandForestry，Yangling712100，China；StateKeyLaboratoryofMolecularBiology，InstituteofBiochernjs仃yandCellBiology，ShanghaiInstitutesforBiologicalSciences，ChineseAcademyofSciencesShanghai200031，China；。StateKeyLaboratoryof，PlantMolecularGenetics，

6、InstituteofPlantPhysiologyandEcology，ShanghaiInstitutesforBiologicalSciences．ChineseAcade—myofSciences，Shanghai200032，China)Abstract：Double—strandRNA(dsRNA)inducedsequence—specificpost—transcriptionalgenesilencingwasknownasRNAinterference(RNAi)．siRNA，animportan

7、tintermediateoftheRNAinterferencepathway。areveryeffectiveinantiviraltherapyinmanyorganismsincludingmammalsandplants．OligonucleotidesexpressedsiRNAweredesignedandsynthesizedaccordingtothecoatprotein(CP)geneofTobaccomosaicvirus(TMV)andsubclonedtothebinaryvectorpB

8、I121．TheinterferenceeffectsofsiRNAtargetingCPgeneonTMVinfectionwerestudiedbyAgrobacterium—mediatedtransientexpressionsystem．OurresultsshowedthattransientlyexpressedsiRNAcoul