Survivin-ASODN对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的促进作用及其机制-论文.pdf

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1、第4O卷第4期吉林大学学报(医学版)Vo1．40No．42014年7月JournalofJilinUniversity(MedicineEdition)Ju1．2014757[文章编号]1671—587X(2014)04—0757—06DOI：10．13481／j．1671—587x．20140413Survivin—ASODN对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的促进作用及其机制齐亚灵，赵文杰，方艳秋。，陈玉强，孟德欣，王伟群，李尧，李文(1．佳木斯大学基础医学院组织与胚胎学教研室，黑龙江佳木斯1540

2、07；2．黑龙江省农垦二院内科，黑龙江佳木斯154002；3．吉林省人民医院肿瘤生物治疗中心，吉林长春130021；4．佳木斯大学附属第一医院普外科，黑龙江佳木斯154000；5．佳木斯大学基础医学院生理学教研室，黑龙江佳木斯154O07)[摘要]目的：应用反义寡核苷酸(ASODN)技术靶向抑制生存素(survivin)基因，研究其对肝癌SMMC一7721细胞凋亡的影响，阐明survivin反义寡核苷酸(survivin-ASODN)促进SMMC-7721细胞凋亡的作用机制。方法：设计合成surviv

3、in-ASODN序列(FAM荧光素标记)。利用脂质体介导法分别用浓度为100、200、300、400和600nmol·Lsurvivin-ASODN转染SMMC-7721细胞(ASODN转染组)，并设空白对照组、空脂质体对照组和正义寡核苷酸(SODN)对照组。应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度survivin-ASODN体外转染SMMC一7721细胞24、48和72h后SMMC-7721细胞凋亡率及细胞周期；Westernblotting法检测survivin蛋白表达水平。结果：与各对照组比较，荧光

4、素标记的ASODN转染SMMC一7721细胞24h后，细胞生长开始受到抑制，细胞凋亡率增加，呈现剂量一时间依赖性(P％0．05)；作用48h后，ASODN转染组细胞在G期前出现明显的亚二倍体凋亡峰，G。／G期细胞明显减少(P<0．05)，G／M期细胞显著增加(P<0．05)，细胞被阻滞于Gz／M期。与各对照组比较，不同浓度ASODN转染组SMMC一7721细胞survivin蛋白表达水平下降(P

5、vin蛋白表达、改变细胞周期进程等机制促进SMMC-7721细胞凋亡，并且呈现时间一剂量依赖性。[关键词]生存素；反义寡核苷酸；肝细胞癌；流式细胞术；转染[中图分类号]R733[文献标志码]APromotioneffectsofsurvivin—ASODNonapoptosisofSMMC-7221cellanditsmechanismQIYa—ling，ZHAOWen-jie，FANGYan-qiu。，CHENYu—qiang，MENGDe—xin，WANGWei—qun，LIYao，LIWen(1

6、．DepartmentofHistologyandEmbryology，JiamusiUniversity，Jiamusi154007，China；2．DepartmentofInternalMedicine，SecondNongkenHospitalofHeilongjiangProvince，Jiamusi154002，China；3．TumorBiotherapyCenter，People’SHospitalofJilinProvince，Changchun130021，China；4．Depa

7、rtmentofGeneralSurgery，FirstAffiliatedHospital，JiamusiUniversity，Jiamusi154002，China；5．DepartmentofPhysiology，SchoolofBasicMedicalSciences，JiamusiUnversity，Jiamusi154007，China)Abstract：ObjectiveTostudytheinfluenceofsurvivintargetedlyinhibitedwithantisen

8、seoligonucle0tide(ASODN)techniqueontheapoptosisofhepatomacarcinomacellsSMMC一7221，andtoclarifythemechanismofpromotioneffectofsurvivin-ASODNontheapoptosisofSMMC一7721cells．MethodsTheASODNsequenceofsurvivinmarkedbyFAMfluoresceinwasde