嗜肺军团菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立-论文.pdf

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1、生物技术通讯LETTERSINBIOTECHNOLOGY⋯vot．·2Z4斗N．o．·60N一-ov．·．·20U1l3j843doi：10．3969~．issn．1009—0002．2013．06．022技术方法嗜肺军团菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立杜昕颖‘，苏晓，王玉飞，龚春丽，庄妤冰，苑锡铜‘，陈泽良‘，袁静‘，宋宏彬，黄留玉。1．军事医学科学院疾病预防控制所，北京100071；2．贵阳医学院临床检验诊断专业，贵州贵阳550004[摘要]目的：建立针对嗜肺军团菌M／p基因的实时荧光定量TaqManPCR检测方法，并进行自来水和空

2、调冷却水模拟标本的检测评价。方法：根据嗜肺军团菌i／p基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针，建立嗜肺军团菌的实时荧光定量TaqManPCR快速检测方法，对方法进行灵敏度及特异性评价，并对自来水和空调冷却水模拟标本中的嗜肺军团菌进行检测。结果：建立的方法对嗜肺军团菌的检测具有高度特异性，与3种非嗜肺军团菌和6种其他呼吸道病原均没有交叉反应；基因组DNA的检测灵敏度为1．6pg／i．zL，模拟自来水和空调冷却水标本的检测灵敏度为10CFU／mL。结论：建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速，适于嗜肺军团菌的日常监测和暴发疫情的

3、应急诊断。[关键词]嗜肺军团菌；荧光定量PCR；TaqMan探针；M／p基因[中图分类号]Q789[文献标识码]A[文章编号]1009—0002(2013)06—0843—04DevelopmentofaRapidTaqManReal-TimePCRAssayforDetec．tionofLegionellapneumophilaDUXin—Ying，SUXiao。，WANGYu-Fei’，GONGChun—Li‘，ZHUANGYu—Bing，YUANXi—Tong，CHENZe-Liang，YUANJing，SONGHong—BinHUAN

4、GLiu—Yu1．InstituteofDiseaseControlandPrevention，AcademyofMilitaryMedicalSciences，Beijing100071；2．DepartmentofClinicalLaboratory，GuiyangMedicalUniversity，Guiyang550004；ChinaCorrespondingauthor．E—mail：yufeiwang21@yahoo．COB[Abstract]Objective：TodevelopaTaqMan—basedreal—timePCR

5、methodforrapiddetectionofLegionellapneu—mophila．Methods：Thesequenceofmacrophageinfectivitypotentiator(M／p)genewasdownloadedfromGenBankandthespecificprimersandTaqManprobeweredesignedintheconservedregionoftheM／pgeneforL．pneu—mophila．Then，thereal-timePCRarrayforrapiddetectiono

6、fL．pneumophilawasdevelopedanditsspceificityandsensitivitywereevaluated．Simulatedenvironmentwatersampleswereusedtoassesstheassay．Results：OnlyL．pneumophilastrainsgeneratedfluorescentsignals．andnocross—reactionwasobservedforthediferentialcontrolstrainsincludingthreenon—pneumop

7、hilastrainsandsixotherrespiratorypathogens．Thedetectionlimitswere1．6pg／I,LLwithgenomicDNAofL．pneumophila，and10CFU／mLwithsimulatedwatersamples．Conclusion：TheTaq—Manreal-timePCRassaydescribedhereisspecific，sensitiveandrapidfordetectionofL．pneumophila，andthisassaycouldbeusedfo

8、rlaboratory-basedmonitoringandemergencydetectionofL．pneumophila．【Keywords】Legionel