布鲁氏菌实时定量荧光 PCR 检测体系的建立及应用-论文.pdf

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1、布鲁氏菌实时定量荧光PCR检测体系的建立及应用石丽瑞，李秀华，韩惠瑛，孟日增(1．山西省阳泉市农业委员会，山西阳泉045000；2．山西省动物疫病预防控制中心，山西太原030027；3．吉林出入境检验检疫局，吉林长春130062)摘要：本根据GenBank上公布的布鲁氏菌BCSP31基因保守区域序列设计合成一对特异性引物与TapMan探针，建立整套快速准确鉴定布鲁氏菌的实时定量荧光PCR检测体系。以实验室构建的克隆有布鲁氏茵目的片段的重组质粒为标准品，进行实时定量荧光PCR反应检测，通过优化反应条件，建立标准曲线。以标准品为模板，对该方法的特异

2、性、敏感性与重复性进行检测与分析。并以临床样本进行检测的结果进行比较分析，结果表明，该检测体系的检测灵敏度高，重复性与特异性良好。本研究建立的实时定量荧光PCR可用于准确检测样本中的少量的布鲁氏菌，具有良好的应用前景和市场价值。关键词：布鲁氏茵；实时定量荧光PCR；样本检测中图分类号：$852．614文献标识码：A文章编号：1005．944X(2014)01．0057．04Establishmentandapplicationofreal-timefluorescencequantitativePCRsystemforthedetectiono

3、fBrucellasppShiLirui，LiXiuhua，HanHuiying2，MengRizeng(1．YangquanCityAgricultureCommission，Yangquan，Shanxi045000；2．ShanxiProvinceAnimalDiseasePreventionandCon~olCenter，Taiyuan，Shanxi030027；3．JilinEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Changchun，Jilin130062)Abstract：Accordingt

4、otheconservedsequencesofBrucellaBCSP31genes，apairofspecificprimersandprobeweredesignedandsynthesizedtoestablisharapidandaccuratedetectionsystemforidentificationofBrucellabyreal-timequantitativePCRassay．ThepreparedBrucellarecombinantplasmidcontainingtargetgenefragmentwastaken

5、asthestandardinthereal—timequantitativefluorescentPCR，andthestandardcurvewasthenestablished．Thespecificity，sensitivityandreproducibilityofthisdetectionsystemweredeterminedwithstandardastemplate．Comparisonofclini-calsamplesandstandardsamplesshowedthatthePCRsystemwasofhighsens

6、itivity，reproducibilityandspecificity．Inconclusion，thestudyestablishedreal—timequantitativefluorescentPCRassaywhichcouldbeusedtodetectsmallamountofBrucellainsample。Wimsoundapplicableprospectandquitegoodmarketvalue．Keywords：Brucella：tealtimefluorescentquantitativePCR：samplede

7、tection布鲁氏菌病(又称马耳他热)是一种人畜共患应、补体结合反应和酶联免疫吸附试验(ELISA)传染病，最早对于该病的报道源于19世纪【】。布等；二是分子生物学手段，包括DNA探针和PCR鲁氏菌主要包括6个种属(羊、牛、猪、犬、绵检测。前者适用于大规模快速检测，后者适用于定羊和沙林鼠种布鲁氏菌)，其中，牛、羊、猪、犬性检测。因此本研究致力于建立敏感、准确的布氏种布鲁氏菌为主要的人畜共患菌种]。感染该病的杆菌实时定量荧光PCR检测方法。典型特征是生殖器官产生炎症、流产、早产、不孕1材料与方法不育等一系列的生殖系统疾病[6-7]o由于布鲁氏菌

8、1．1材料不同种属的布鲁氏菌菌种购自中科院病隐性病例多，临床上大多不具有明显症状，往往或由本单位保存；对照菌株等均购自中国兽医药品造成对本病的忽视。此