啤酒酵母生物合成胞苷三磷酸的实验研究.pdf

《啤酒酵母生物合成胞苷三磷酸的实验研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、山东化工·24·SHAND0NGCHEMICALINDUSTRY2014年第43卷啤酒酵母生物合成胞苷三磷酸的实验研究刘杰，顾运江(浙江工业大学化学工程学院，浙江杭州310014)摘耍：以胞苷一磷酸(CMP)为底物，利用啤酒酵母细胞内的酶系催化合成了胞苷三磷酸(CTP)，实验采用高效液相色谱分析了底物浓度、葡萄糖浓度、磷酸盐浓度、酵母量、反应时间等因素对转化反应的影响。结果表明，最佳转化条件为：CMP20mmoVL、葡萄糖150mmo~L、磷酸盐250mmoVL、酵母量0．3g／mL、反应时间75min。在此条件下，CTP的平均产率可高达59-01％。关键词：胞苷三磷酸；啤

2、酒酵母；生物转化；最优条件中图分类号：TQ028文献标识码：A文章m~"：1008—021X(2014)07—0024—04BiosynthesisofCytidineTriphosphatefromCytidineMonophosphatebySaccharomycesCerevisiae￡此。GuYunjiang(CollegeofChemicalEngineering，Zh~iangUniversityofTechnology，Hangzhou310014，CHna)Abstract：Cytidinetriphosphate(CTP)producedfromeytid

3、inemonophosphate(CMP)utilizingenzymesinsaccharomycescerevisiaewasstudied．Theefectsofsomekeyfactors，suchastheconcentrationofCMP，glucose，phosphate，yeastcellsandreactiontimeonthebiotransformafionprocesswerestudiedbyHPLCmethod．Resultsshowedthattheoptimalconditionswere：obtainedasfollow：20mmol／L

4、CMP，150mmol／Ls1．eose，250mmol／Lphosphate，0．3g／mLyeastandreactiontime75min．Underoptimalconditions．yieldofCTPwasupto59．01％．Keywords：eytidinctriphosphate；saccharomyceseerevisiae；biotransformation；optimalcondition胞苷三磷酸(CytidineTriphosohate，CTP)，又称胞嘧啶核藏中心；CMP(98％)，CTP(98％)，杭州美亚药业有限公司；苷三磷酸、三磷酸胞苷，

5、是一种高能磷酸化合物，在生物体内其它试剂均为国产分析纯。主要参与核酸和磷脂类的合成代谢，具有调节和促进受损神1．2主要仪器经组织再生和修复的功能，可改善脂肪代谢，防止和缓解血高效液相色谱(Agilent1260infinity)，美国安捷伦公司；管硬化，是一种重要的心脑血管类药物。同时CTP也是合台式高速离心机(TG16一WS)，上海卢湘仪离心机仪器有限成CDP一胆碱、CDP一二脂酰甘油等多种药物的中间公司；恒温培养摇床(Hz一2011K—A)，太仓市华利达实验体’。啤酒酵母因来源广，培养方便，成本低，生产周期设备有限公司。短，被广泛应用于CTP的转化合成。1．3实验分析方

6、法利用酵母细胞转化合成CTP等核酸类物质时，细胞膜本实验采用高效液相色谱确定转化反应中底物CMP的的通透性直接影响酶促反应速率’。因为细胞膜对细胞转化率及CTP产率。色谱条件：Agilent1260Infinity液相色代谢环境具有重要的保护和调节作用，不仅把细胞质与外界谱系统，ZORBAXSB—C18色谱柱(5，4．6mm×150环境隔开，使细胞获得一个相对稳定的环境，而且细胞膜在mm)，DAD检测器(G1315D)；甲醇：0．6％磷酸水溶液(三乙细胞与环境之间的物质交换、能量转换和信号传导等过程中胺调节pH值至6．6)(体积比为6：94)；柱温30℃，检测波也起着重要作

7、用。一般小分子量的物质如葡萄糖、无机盐离子能自由出入细胞，但一些大分子、胞内的酶系难以自由通长271nm，所有样品在进样前均用0．45tun级微孔滤膜过过。因此，研究如何提高细胞膜的通透性对利用微生物细胞滤，进样量2OL，流量0．5mL／min。转化反应十分重要。常见提高细胞膜通透性的方法有超声1．4反应初始条件波处理、电处理、反复冻融、渗透压、表面活性剂、化学法在50mL锥形瓶中加入3g经反复冻融的啤酒酵母，再等J。相对于化学方法，物理方法效果较好，但操作难度加入10mL底物溶液(不同浓度CMP、葡萄糖150mm