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时间:2020-04-20
《啤酒酵母生物合成胞苷三磷酸的实验研究.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、山东化工·24·SHAND0NGCHEMICALINDUSTRY2014年第43卷啤酒酵母生物合成胞苷三磷酸的实验研究刘杰,顾运江(浙江工业大学化学工程学院,浙江杭州310014)摘耍:以胞苷一磷酸(CMP)为底物,利用啤酒酵母细胞内的酶系催化合成了胞苷三磷酸(CTP),实验采用高效液相色谱分析了底物浓度、葡萄糖浓度、磷酸盐浓度、酵母量、反应时间等因素对转化反应的影响。结果表明,最佳转化条件为:CMP20mmoVL、葡萄糖150mmo~L、磷酸盐250mmoVL、酵母量0.3g/mL、反应时间75min。在此条件下,CTP的平均产率可高达59-01%。关键词:胞苷三磷酸;啤
2、酒酵母;生物转化;最优条件中图分类号:TQ028文献标识码:A文章m~":1008—021X(2014)07—0024—04BiosynthesisofCytidineTriphosphatefromCytidineMonophosphatebySaccharomycesCerevisiae£此。GuYunjiang(CollegeofChemicalEngineering,Zh~iangUniversityofTechnology,Hangzhou310014,CHna)Abstract:Cytidinetriphosphate(CTP)producedfromeytid
3、inemonophosphate(CMP)utilizingenzymesinsaccharomycescerevisiaewasstudied.Theefectsofsomekeyfactors,suchastheconcentrationofCMP,glucose,phosphate,yeastcellsandreactiontimeonthebiotransformafionprocesswerestudiedbyHPLCmethod.Resultsshowedthattheoptimalconditionswere:obtainedasfollow:20mmol/L
4、CMP,150mmol/Ls1.eose,250mmol/Lphosphate,0.3g/mLyeastandreactiontime75min.Underoptimalconditions.yieldofCTPwasupto59.01%.Keywords:eytidinctriphosphate;saccharomyceseerevisiae;biotransformation;optimalcondition胞苷三磷酸(CytidineTriphosohate,CTP),又称胞嘧啶核藏中心;CMP(98%),CTP(98%),杭州美亚药业有限公司;苷三磷酸、三磷酸胞苷,
5、是一种高能磷酸化合物,在生物体内其它试剂均为国产分析纯。主要参与核酸和磷脂类的合成代谢,具有调节和促进受损神1.2主要仪器经组织再生和修复的功能,可改善脂肪代谢,防止和缓解血高效液相色谱(Agilent1260infinity),美国安捷伦公司;管硬化,是一种重要的心脑血管类药物。同时CTP也是合台式高速离心机(TG16一WS),上海卢湘仪离心机仪器有限成CDP一胆碱、CDP一二脂酰甘油等多种药物的中间公司;恒温培养摇床(Hz一2011K—A),太仓市华利达实验体’。啤酒酵母因来源广,培养方便,成本低,生产周期设备有限公司。短,被广泛应用于CTP的转化合成。1.3实验分析方
6、法利用酵母细胞转化合成CTP等核酸类物质时,细胞膜本实验采用高效液相色谱确定转化反应中底物CMP的的通透性直接影响酶促反应速率’。因为细胞膜对细胞转化率及CTP产率。色谱条件:Agilent1260Infinity液相色代谢环境具有重要的保护和调节作用,不仅把细胞质与外界谱系统,ZORBAXSB—C18色谱柱(5,4.6mm×150环境隔开,使细胞获得一个相对稳定的环境,而且细胞膜在mm),DAD检测器(G1315D);甲醇:0.6%磷酸水溶液(三乙细胞与环境之间的物质交换、能量转换和信号传导等过程中胺调节pH值至6.6)(体积比为6:94);柱温30℃,检测波也起着重要作
7、用。一般小分子量的物质如葡萄糖、无机盐离子能自由出入细胞,但一些大分子、胞内的酶系难以自由通长271nm,所有样品在进样前均用0.45tun级微孔滤膜过过。因此,研究如何提高细胞膜的通透性对利用微生物细胞滤,进样量2OL,流量0.5mL/min。转化反应十分重要。常见提高细胞膜通透性的方法有超声1.4反应初始条件波处理、电处理、反复冻融、渗透压、表面活性剂、化学法在50mL锥形瓶中加入3g经反复冻融的啤酒酵母,再等J。相对于化学方法,物理方法效果较好,但操作难度加入10mL底物溶液(不同浓度CMP、葡萄糖150mm
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