豆豉纤溶酶高产突变株的选育-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiA．Sci．2012，40(17)：9473—9474责任编辑李菲菲责任校对卢瑶豆豉纤溶酶高产突变株的选育黄晓杰，矫明书，吴晓萌(辽宁医学院食品科学与工程学院，辽宁锦州121001)摘要[目的]从豆豉中筛选出高产纤溶酶的菌株，并通过平板筛选得到高产突变株。[方法]从6种不同宴豉样品中，筛选得到具有较高纤溶酶活性的菌株，采用物理化学诱变方法进行复合诱变，再利用纤维蛋白平板对诱变后菌株进行筛选。[结果]得到1株高纤溶酶活力菌株，命名为DC—YC41，酶活达到742IU／ml

2、。[结论]初步判断，得到的这株高纤溶酶活力菌株为枯草芽孢杆菌。关键词豆豉纤溶酶；酶活；选育中图分类号S188文献标识码A文章编号0517—6611(2012)17—09473—02Selection0flIigllYieldMutantsofDouchiFibrinolyticEnzymeHUANGXiao~ieetal(CollegeofFoodScienceandEngineering，LiaoningMedicalUniversity，Jinzhou，Liaoning121001)Abstract[Obj

3、ective]ToselectthehighyieldstrainsproducingfibrinolyticenzymefromDouchiproductsandthenfindoutthehigh—yieldmu—tantsthroughplatescreening．[Method]Thehighyieldstrainsproducingfibfinol~icenzymewerescreenedoutfromsixdifferentDouchisamples，andthencompoundmutatedby

4、thephysio—chemicalmutationmethod，themutantswerescreenedoutwithfibrinplate．[Result]OnehighyieldstrainproducingfibrinolyticenzymewasobtainedandnamedDC—YC41，itsenzymeactivitywas742IU／m1．『Conclusion]Thestrainwasprelimi—narilyidentifiedtobeBacillussubtil~．Keyword

5、sDouchifibrinolyticenzyme；Enzymeactivity；Selection豆豉纤溶酶(Dochifibrinolytieenzyme，以下简称DCFE，存于斜面。将上述菌株对应接于种子液，培养12h后接入发E．C．3．4．21．7)是一种由我国传统发酵食品豆豉中分离出来酵液(50／250ml三角瓶)，接种量为2．0％。37oC，在复式摇的具有较高纤溶酶酶活的丝氨酸蛋白酶。它不但可直接溶床180r／min培养72h后，将发酵液离心，取上清液，稀释至解纤维蛋白，抑制血栓形成，而且具有抑制机

6、体凝血，抗血小不同的倍数，测定其纤溶酶活力，挑选酶活较高的菌株，保存板聚集，可用于开发新一代的溶栓剂或保健食品，具有极为于斜面。诱人的开发前景，豆豉纤溶酶的产量和酶活力直接制约着其1．4筛选平板的制备进一步的开发和利用。笔者从豆豉中筛选出1株高产纤溶1．4．1酪蛋白筛选平板。O．1mol／LNa2HPO20ml，0．1酶的菌株，诱变使其产酶能力提高，通过平板筛选得到高产mol／LKH2PO42ml，酪蛋白0．4％，琼脂4g，水178ml，pH突变株，为进一步研究奠定基础。7．2。先将酪蛋白加入到NaHPO溶液中

7、，加热溶解，再加1材料与方法KH2PO、琼脂、水121oC灭菌30min。1．1材料原料为产自四川、云南、辽宁三地的6种豆豉。1．4．2纤维蛋白平板的制备。参照Astrup的方法。主要试剂：牛血纤维蛋白原、凝血酶、标准激酶，中国药品生1．5菌种常规鉴定参考《伯杰细菌鉴定手册》第8版物制品检定所；冻干牛血纤维蛋白原，上海莱士血制品有限及《常见细菌系统鉴定手册》等文献的方法进行菌种鉴定。公司；其他试剂为国产分析纯或进口分装。2结果与分析．1．2培养基种子培养基：蛋白胨1．0％，牛肉浸膏0．3％，2．1出发菌株的筛选

8、结果从6种样品中筛选豆豉纤溶酶氯化钠0．5％，pH7．4；初筛培养基：麦芽糖1．5％，酪蛋白产生菌，经过初筛和复筛，从云南豆豉中筛选的菌株产豆豉1．0％，琼脂2．0％，NaCl1．5％，调节pH至7．2～7．4；发酵培纤溶酶的酶活最高，达到262IU／ml。用平板法测定豆豉纤养基：麦芽糖1．5％，大豆蛋白胨2．0％，牛肉浸膏0．15％，溶酶的酶活，纤溶圈越大表示酶活越高。KH2PO40