豆豉纤溶酶基因在枯草杆菌中表达的研究进展-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2012，40(7)：3881—3883责任编辑朱琼琼责任校对李岩豆豉纤溶酶基因在枯草杆菌中表达的研究进展齐海萍，胡文忠，姜爱丽，田密霞(大连民族学院生物技术与资源利用国家民委一教育部重点实验室，辽宁大连116600)摘要文中介绍了豆豉纤溶酶的分子生物学特性及其基因在宿主表达菌——枯草杆菌中表达的研究进展。关键词豆豉纤溶酶；基因表达；枯草杆茵中图分类号$509．9文献标识码A文章编号0517—6611(2012)07—03881—03ResearchAdva

2、ncesintheExpressionofDochiFibrinolyticEnzymeGeneinBacillussubtilisQIHai-pingetal(KeyLaboratoryofBiotechnologyandResourcesUtilization，DalianNationalitiesUniversity，Dalian，Liaoning116600)AbstractThepaperintroducedthemolecularpropertiesofDochifibrinolyticenzymesan

3、dtheresearchadvancesofitsgeneexpressioninBa—cillussubtilis．KeywordsDochifibrinolytieenzyme；Geneexpression；Bacillussubtilis心脑血管疾病正日益严重危害着人类的健康，对于复杂bp，编码275个氨基酸残基，分子量为27700，推导出的N’端临床症状的关键点调制需提供新的治疗方法。溶栓疗法是氨基酸序列与豆豉纤溶酶N端氨基酸测序结果完全一致，说治疗这类疾病的常规方法之一。但至今所开发的具有较好明克隆到的确实

4、是该酶基因。对豆豉纤溶酶与纳豆激酶进疗效、副作用小的药物不多，如现在常用的及一些正在开发行同源性分析，发现两者核苷酸和氨基酸序列的同源性分别的同类药物尿激酶、链激酶、重组组织型纤溶酶原激活剂等，为80．0％和86．5％E9]，从分子水平上证明了两者不是同一存在半衰期短、副作用大、价格昂贵等缺点，难以成为推广使种酶，提示豆豉纤溶酶是一种新型溶栓酶。将成熟肽编码区用的药品。而豆豉纤溶酶作为一种重要的微生物来源溶栓片段克隆到大肠杆菌载体pET-15b中，转化到E．coliBL2药物，来源于传统大豆发酵制品豆豉，其安全性高且

5、口服方(DE3)中，进行高效融合表达。IPTG可诱导表达大量的纤溶便，是一种极具潜力的新型溶栓药物。酶融合蛋白，占菌体可溶性蛋白的40％。罗文华等”对枯自1987年日本学者Sumi等首先报道了从日本发酵草芽孢杆菌DC．12的DFE基因序列进行了同源性比对，结食品纳豆中分离出一种具有强烈纤溶活性的酶——纳豆激果表明克隆的纤溶酶基因序列与解淀粉芽孢杆菌DC4的豆酶(Nattokinase，NK)以来，国内外学者对纳豆激酶进行了大豉纤溶酶基因存在14个碱基的差异，并导致了2个氨基酸量的研究。我国学者自20世纪90年代起开展

6、了对纳豆激的改变。这2个氨基酸的改变导致了酶底物特异性的变化。酶的研究，至今不仅分离到了多株溶栓酶产酶菌，而且对豆Wang等通过对SubtilisinFS33与其他纤溶酶N端氨基酸豉纤溶酶基因的克隆、表达及表达产物的活性方面序列比对发现，SubtilisinFS33与已知的NK、SubtilisinE等均进行了研究。豆豉纤溶酶可在大肠杆菌、毕赤酵母、枯草杆有较高的同源性，但它们的相对分子质量、底物特异性、酰胺菌中活性表达，表明利用基因工程菌生产豆豉纤溶酶具有良活力等方面表现出了较大差异。好的研究前景。虽然有文献报道蛋

7、白酶基因在大肠杆菌中2表达宿主菌——枯草杆菌的表达，但表达产物多数只能分泌到胞周问质，分泌到胞外枯草杆菌是革兰氏阳性细菌，细胞壁不含内毒素，能形的极少，这是因为大肠杆菌缺少一个真正的分泌系统。利用成芽孢，是一些重要工业酶制剂的生产菌。自1958年Spiz-大肠杆菌表达豆豉纤溶酶产量高且表达出的包涵体经变性、izen_j发现枯草杆菌168菌株能摄取外源基因后，随着DNA复性后具有纤溶酶活性，但目前尚缺乏大规模发酵及纯化工重组技术的发明，特别是金黄色葡萄球菌(Stafylococcusn“一艺的研究。而在枯草杆菌、毕赤酵

8、母中表达时虽然表达产物t'el~)带抗性标记基因的质粒可作为载体的发现，枯草杆菌基以可溶形式分泌到胞外，但豆豉纤溶酶的表达量较低。因因工程的研究迅速发展。此，若要利用基因工程菌大规模生产豆豉纤溶酶还需更加深作为外源基因表达的宿主，枯草杆菌有以下优点：①非入的研究。文中重点对豆豉纤溶酶的分子生物学特性及其致病性，不像大肠杆菌那样具有热源性脂多糖；