豆豉纤溶酶产酶菌的筛选及菌种保藏-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2012，40(10)：6187—6188责任编辑金苹责任校对李岩豆豉纤溶酶产酶菌的筛选及菌种保藏张丽梅(宜春职业技术学院，江西宜春336000)摘要[目的]从豆豉产品中筛选分离活性较高的豆豉纤溶酶产酶菌，并时菌种进行保藏。[方法]用自制的猪血粉为底物配制筛选培养基进行豆豉纤溶酶产酶茵的筛选，然后根据水解圈的大小筛选活性高的产酶菌株，最后将其保藏于LB培养基中。[结果]成功从湖南、广东、江西等地产的豆豉中筛选到一株溶栓活性相对较高的产酶菌。[结论]该研究

2、为新型溶栓药物的开发奠定了基础。关键词豆豉纤溶酶；产酶菌；筛选；菌种保藏中图分类号S503．7文献标识码A文章编号0517—6611(2012)10—06187一o2SereeningandPreservationofDouchiFibrinol【yticEnzymeProducingStrainZHANGLi．mei(YichunVocationalTechnicalCollege．Yiehun，Jiangxi336000)Abstract[Objective]Toisolateandpreserveahigh

3、·activityDouchifibrinolyticenzymeproducingstrainfromDouchiproducts．[Method]Theselecti0nofDouchifibrinolyticenzymeproducingstrainwascarriedoutontheselectedmediumpreparedwithselGmadeporkbloodpow—der．thestrainwiththehighestactivitywasscreenedoutaccordingtothesiz

4、eofhydrolysiscycle，andthenpreservedinLBmedium．[Result]ADouchifibrinolyticenzymeproudcingstrainwithhighthrombolyticactivitywasscreenedoutfromtheDouchiproducedinHunan．GuangdongandJiangxiProvinces．『Conclusion]Thestudylaidfoundationforthedevelopmentofnew—typethro

5、mbolytiedrugs．KeywordsDouchiflbrinolyticenzyme：Enzyme—producingstrains；Screening；Strainpreservation心脑血管疾病是当今严重危害人类健康，引发死亡率最1．2方法高的疾病之一，其中血管栓塞类疾病如脑栓塞等给患者带来1．2．1底物的制备。将从市场上买回的新鲜猪血稍作去水处极大痛苦。治疗血管栓塞类疾病目前最为有效的方法是溶理后，于烘烤箱中55℃烘烤过夜，然后用粉碎机将烘干的猪血栓疗法。然而，传统溶栓药物如尿激酶、链激酶等具有

6、半衰打碎成粉，过120目筛，用干净的瓶子收集，存放于干燥处。期短、价格昂贵、易出血、口服效率低等缺点。因此，开发新1．2．2菌株的筛选。①首先称取猪血粉2．0g，蛋白胨0．5型溶栓剂尤其是口服有效的溶栓剂是许多学者研究的目g，酵母粉0．5g，氯化钠1．0g，琼脂粉1．5g，量取蒸馏水99标⋯。自从1987年日本科学家须见洋行等首先从日本纳豆rnl，配制筛选培养基。将配制好的筛选培养基与培养皿高压食品中分离到一种具有强烈纤溶活性的酶(纳豆激酶)以灭菌15min后，均匀倒平板。②分别取各种豆豉样品1．0g，来，微生物

7、来源的新型溶栓药物的研究开发受到世界各国加入到盛有95ml无菌水的锥形瓶中，放人恒温培养振荡器学者的重视。振荡20min，即成1％样品稀释液。将1％样品分别稀释成我国研究人员从豆豉中分离得到了一种与纳豆激酶相0．100％、0．010％、0．001％的溶液后，分别涂布于筛选培养基似的高活性纤溶蛋白酶，并命名为豆豉纤溶酶。有研究表平板，放入恒温培养箱中37℃倒置培养18h以上，观察豆豉明，豆豉纤溶酶是豆豉在发酵过程中由枯草芽孢杆菌(Bacil—纤溶酶产霉菌的产生情况。然后用灭菌的牙签挑取各平板lussubtilis)

8、产生的一种丝氨酸蛋白酶；对其进行N2末端的中水解圈较大的菌落接种到画好格子的筛选培养基平板中，氨基酸序列和基因序列的分析表明，该酶是一种新型的纤溶于恒温培养箱中37℃培养48h，观察水解圈的大小，并测量酶，与纳豆激酶相比存在显著差异。豆豉纤溶酶不仅具有各水解圈直径及菌直径，试验重复8次。通过计算水解圈面较高的纤溶活性，且安全无毒、持续作用时间长、分子量小，积与菌种面积的比