致病性大肠杆菌苗用菌株的原生质体融合的研究

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1、36JournalofAnimalScienceandVeterinaryMedicineVo1．29No．52010致病性大肠杆菌苗用菌株的原生质体融合的研究苟想珍，党岩一，孙春香，马志宏，杨增歧，王晶珏，陈德坤(1．甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃平凉744000；2．西北农林科技大学)摘要：对筛选的5株大肠杆菌(E：：O、E：0E：OE：OE22：OI38)进行药敏试验以及致病性大肠杆茵原生质的制备、融合和筛选试验。结果表明：①5株大肠杆菌对多种抗菌素存在抗药性，并且这种抗药性能进行培育，同时，在原生质的融合过程中能递进；②大肠杆菌原生质体选择的最佳组合是：溶茵酶2．0L，处理时间是2

2、0min；③大肠杆菌的融合率在10左右，大肠杆菌之间的融合率为10I6左右；共选出3株融合菌株为E。一、E6一E和E：一E：：，各融合株的生化特征介于起源菌株的生化特征之间，有2株融合株的抗原特征合原菌株各自的抗原成分。关键词：致病性大肠杆菌；苗用菌株；原生质体融合[中图分类号】$852．612[文献标识码]A[文章编号]1004-6704(2010)05-0036-04StudyonProtoplastFusionofVaccineUseStrainonthePathogenicEscherichiaColiGOUXiang—zhen，DANGYanhSUNChun—xiang，MA

3、Zhi—hong，，YANGZeng—qi，WANGJing—jue，CHENDe—kun(1．GansuInstituteofAnimalScienceandVeterinaryMedieine，PingliangGansu744000，China；2．Noahw~tA&FUniversity)Abstract：Inthistest，5strainsescherichiacolis(E2：O2、E6：078、E7：O8、E9：09、E22：O138)wereelectedtomakedrugsensitiveexperimentandthetestofpreparation，fusi

4、on，andselectiononpathogenicescherichiacoliprotoplasm．Theresultsshowedthat：(~)FivestrainsescherichiacoliexistedDrug—resistanceforvariousantibioticsandtheDrug—resistancecouldbecultivated，meanwhileitcouldbeprogressiveontheprocessofProtoplastFusion．②ThebestcombinationOfescherichiaprotoplastWasthatth

5、elysozymeandthetimewere2．0g／Land20rain，respectively．(~)FusionrateofEscherichiacoliwasabout10一，andfusionrateamongtheEsehe-richiacoliWasabout10-6．ThreefusionstrainsselectedwereE2一E6，E6一E7andE2一E22，respectively．Thebiochemicalcharaeteris—ticofeachstrainlaybetweenthatoftheoriginstrains．andtheantigenc

6、haracteristicsoftwostrainscontmnedantigencomponentsof0-riginalstrains．Keywords：pathogenicescherichiacoli；vaccineusestrain；protoplastfusion近年来，随着我国养禽业的快速发展，大肠杆菌1材料与方法病的流行日趋严重，给畜牧业造成了较大的经济损失。同时，染有大肠埃希氏菌的肉、蛋也对消费者的1．1材料健康构成了威胁。为了研制适合我省防治需要的大1．1．1菌株5株苗用大肠杆菌分离自甘肃平凉、肠杆菌菌苗，我们在分离及筛选了甘肃省东中部地庆阳、定西和天水地区。区猪和

7、鸡致病性大肠杆菌的基础上，以原生质体融1．1．2试剂Tris碱，常规试剂均为国产分析纯合遗传育种新技术为手段，对大肠杆菌的原生质体试剂；抗生素购自甘肃省平凉市医药公司。融合进行了研究，为大肠杆菌病的灭活苗的研制打1．1．3培养基及溶液完全培养基(NB)：1％胰下基础。蛋白胨，0．2％酵母抽提物，0．5％牛肉膏，0．5％葡萄糖，0．85％NaC1，1．8％琼脂粉。[收稿日期]20104)4-06[基金项目】甘肃省技术研究与开发专项计划项目(QS0