资源描述：
《杨树原生质体融合的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、杨树原生质体融合的研究作者：童威导师：诸葛强摘要:本文以南林895杨(PopulusXeuramcricanacv'Nanlin895')、转Bt基因南林895杨和银白杨(P.alba)为材料，在建立悬浮细胞系及植株再生的基础上，开展杨树原生质体分离和电融合研究，筛选适合杨树原生质体分离与纯化、原生质体电融合及杂种筛选和培养等条件、方法。旨在为杨树体细胞杂交种质创新研究捉供实验依据。主要研究结果如下：幼嫩茎段较适合诱导愈伤组织。愈伤诱导培养基为:MS+2,4-D2mg/Lo将诱导出的愈伤组织转入愈伤继代培养基：MS+2,4-D2mg/L+
2、KT0.2mg/L,经广5次继代培养后获得淡黄色、结构疏松的胚性愈伤组织，将其转入液体培养基：MS+2,4-D加g/L+NAAO.2mg/L+KT0.lmg/L+水解酪蛋白500mg/L,建立杨树悬浮细胞系。关键词：杨树：原生质体分离：电融合Tnthispaper,PopulusXeuramericanacv'Nanlin895',transgenicPopulusXeuramericarmcv^Ntinlin895"withBtgeneandP・ablawereusedasexperimentmaterials,onthebaseoft
3、heestablishmentofsuspensioncultureandplantregeneration,wcstudiedprotoplastisolationandprotoplastelectofusioninpoplar,selectedtheoptimumconditionsandmethodsfortheprotoplastisolation,protoplastpurification,protoplasteletrofusion,protoplastcultureandselectingthesomatichybrid
4、s.Themainresultsdescribedasfollows:Theplantlettwigswerefeasibletoinducecallus.ThemediumforcallusinducementwasMS+2,4-D2mg/L.TheinducedcalliweretransferredintothemediumforcallussubcultureMS+2,4-D2mg/L+KT0.2mg/L.Thecallibecomelightyellowandtextureshortafter4-5subcultureperio
5、ds,whichwereusedtoestablishcellsuspensioncultureofpoplarwiththeliquidmediumMS+2,4-D2mg/L+NAA0.2mg/L+KT0.lmg/L+CH500mg/L;Keyswords：Poplar;ProtoplastisolationElectrofusion1・杨树原生质体的融合实验材料：实验材料为本实验室的南林895杨(PopulusXeuramericanacv"Nanlin895‘)、转Bt基因南林895杨、银白杨(P.alba)组培苗，分别収其茎段、叶
6、柄和叶片作为外植体。1.1.植物细胞悬浮培养植物细胞培养的概念包括植物器官，组织，细胞，原生质体及胚的培养，其核心理论依据是植物细胞的全能性，他包括植物细胞的“形态全能性”(StewardFCetal.,1964)和“化学全能性”(ZenkMHetal.,1975)两个方血的概念，即植物体的任何一个细胞都包含有整株植物全部的遗传信息，在一定条件下具有发育成一个完整的植株的能力。植物细胞悬浮培养即植物细胞或小的细胞聚集体在液体培养基中于摇床上进行悬浮培养，这些细胞和小聚集体来自愈伤组织，某个器官或组织，甚至幼嫩的植株，通过物理或化学的方法进
7、行分离获得(路铁钢和叶和春,1995)。愈伤组织或悬浮愈伤组织作为原牛•质体培养的起始材料，有其它材料所不及的优越性:一是获得的原生质体产量高；二是分离的原生质体再生能力强，能够在培养过程中持续地分裂并保持较强的器官分化能力；三是重复性良好。因此，获得良好的愈伤纽•织是原生质体分离、培养及细胞融合的基础。1.2.植物原生质体分离和培养选川时应根据植物材料和酶制品的特性进行综合考虑。此外，还必须控制好酶解条件。影响酶解过程的主要因索冇温度、pH值、渗透压、离了浓度、振荡及预处理等。一般情况下，酶解温度为25〜30°C,酶解液的pH值根据所用
8、酶种类的不同可以在5.4~6.2之间变动,渗压剂的使用浓度，一般控制在0.45~0.8mmol/L范围内。腮解前对材料进行轻微的质壁分离，酶解时低速振荡(40rpm)以及酶解液屮高钙镁离子浓度
