响应面法优化纳豆菌糖肽超声提取工艺-论文.pdf

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1、第14卷第7期中国食品学报Vo1．14No．72014年7月JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnologyJu1．2014响应面法优化纳豆菌糖肽超声提取工艺沈柱英黄占旺吴少福康小斐曹靖文(江西农业大学食品科学与工程学院江西省天然产物与功能食品重点实验室南昌330045)摘要采用响应面分析法优化超声辅助提取纳豆茵糖肽工艺。在单因素试验的基础上。研究液料比、NaC1浓度、超声时间对纳豆茵糖肽提取得率的影响。通过Box—Behnken试验设计和响应面分析法确定提取BNP的最佳

2、工艺务件。试验结果表明，超声辅助提取纳豆茵糖肽的最佳工艺条件是：液料比24：1mL／g，NaC1浓度0．15mol／L，提取时间41rain。在此条件下，BNP最高提取得率为1．89％。关键词纳豆；糖肽；超声辅助提取；响应面法分析文章编号1009—7848(2014)07—0110—08多糖又称多聚糖(polysaccharide)，是1类具以纳豆冻干粉为研究对象，采用响应面分析法对有生物活性的高分子化合物．大量药理及I临床研超声提取BNP工艺进行优化，以期获得较高的提究证实多糖具有抗氧化衰老【”，抑制肿瘤[21，免疫调取率

3、，为后续BNP活性研究提供试验基础。节嘲，降血糖嗍，降血脂嘲等多种生理功能。随着糖生物学研究的迅速发展，研究发现糖蛋白(糖肽)是体现糖类化合物最重要生物活性的生物分子之1材料与方法一在细胞一细胞识别，细胞的信号调节，细胞分化，1．1材料与试剂及免疫应答等重要生物学过程中发挥着重要作黄豆经清洗浸泡，高温灭菌后，接纳豆芽孢杆用。Wang等[91提取人参糖肽，发现其对正常小鼠及菌，34℃发酵24h，于4℃冰箱中后熟12h，研磨、由四氧嘧啶和链尿菌素引起的高血糖大鼠具有降冻干、粉碎过40目筛。采用石油醚(30～60℃)，45低血糖和

4、肝糖原的作用：张俊堂【，ol发现薄芝糖肽℃冷凝回流8～12h后静置，倾去石油醚层，剩余样具有减少肺癌患者胸腔积液以及缩小肿瘤的作品溶剂挥干，得脱脂纳豆冻干粉。用；任国艳等【“】研究表明海蜇糖肽可以提高小鼠石油醚(30～60oC)、浓硫酸、无水乙醇、考马斯脾细胞增殖和转化能力以及碳廓清能力。亮蓝、葡萄糖均为分析纯；苯酚，重蒸。纳豆是我国传统发酵制品．由纳豆芽孢杆菌1．2仪器与设备(Bacillusnatto)在一定温度、湿度条件下发酵蒸煮SB一3200超声波清洗机、Scientz系列真空冷大豆制备而成。近年来，大量研究表明纳豆

5、具有溶冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司；UV一血栓【12l，抗肿瘤【l31，抗氧化【M5】，预防骨质疏松【61等5200pc紫外一可见分光光度计，上海元析仪器有限多种保健功能，其活性成分如纳豆激酶、染料木公司；TGL一20000一CR高速台式冷冻离心机，上海素、纳豆多糖、维生素K和一高聚谷氨酸等相继安亭科技仪器厂；QT一2漩涡混合器，上海琪特分被发现。纳豆菌糖肽(BNP)，即从纳豆中提取得到析仪器有限公司。的l类蛋白结合多糖，目前关于该糖复合物的提1．3方法取及其功能的研究国内外尚未见相关报道。本文1-3．1纳豆菌糖肽

6、的提取【7l称取脱脂纳豆冻干粉，加入适量的提取液于漩涡混合器上充分混合，收稿日期：2013—07—21提取一定的时间后，离心(3000r／min，15min)，收基金项目：国家自然科学基金项目(31160337)集提取液．加入无水乙醇，至乙醇的体积分数为作者简介：沈柱英，女，1988年出生，硕士生75％，离心(3900r／min，20min)，收集沉淀，定容，通讯作者：黄占旺第14卷第7期响应面法优化纳豆茵糖肽超声提取工艺备用。定的理论BNP质量。l-3．2苯酚一硫酸法葡萄糖标准曲线绘制【8】准(1)BNP粗品的制备：脱脂纳

7、豆冻干粉经水提确称取烘干至恒质量的葡萄糖0．0625g。定容至醇沉后，沉淀用少量的水溶解，冷冻干燥后得BNP500mL，即得到125}~g／mL的标准葡萄糖溶液。分粗品。别取20，30，40，50，60，70，80L标准溶液于具塞(2)理论BNP质量：称取5mgBNP粗品定容试管中．用蒸馏水补齐至1mL。然后加入1mL至50mL，分别取1．0mL至3支具塞试管中．按1．6％的苯酚溶液和5mL浓硫酸．摇匀．静置303．2节方法显色。于490nm波长处测定吸光度．以min，以1mL蒸馏水作对照，按同样方法显色，于1．0mL蒸馏水

8、为空白。最后根据回归方程计算理490nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，论BNP含量。糖含量为横坐标，绘制标准曲线。标准曲线线性回1-3．4单因素试验准确称取脱脂纳豆冻干粉0．归方程为：Y=I．1153X+0．0Cl94，R=0．9980。5g若干份，以一定浓度的NaC1溶液作为提取溶