金黄色葡萄球菌磷脂酶C克隆表达及其脱胶应用-论文.pdf

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1、10粮食与油脂2014年第27卷第4期金黄色葡萄球菌磷脂酶C克隆表达及其脱胶应用余榛榛。芮丽莲，梁丽，常明，王兴国(江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，食品安全与营养协同创新中心，江苏无锡214122)摘要：该实验对金黄色葡萄球菌磷脂酶C(phospholipaseC，PLC)基因在大肠杆菌(E．coilBL21(DE3))中进行重组表达。通过发酵优化，最终在30℃条件下，利用0．001mmol／LIPTG诱导表达10h，重组酶活达到47．4U／mL。利用该重组PLC对大豆毛油进行脱胶处理，确定了最佳

2、脱胶条件为：50℃、1200U／kg油、pH4．7，反应时间2h，最终可使大豆毛油中磷含量从266mg／kg降低至3．5mg／kg，能够完全满足物理精炼要求。金黄色葡萄球菌磷脂酶c的重组表达及其在大豆毛油的脱胶应用为酶法脱胶技术的开发提供了理论支持。关键词：磷脂酶C；金黄色葡萄球菌；重组表达；大豆毛油；脱胶rlt1l1nec●loni■n~ant1lexpress●lonotn~⋯itapny’lococcusaureusphospholipaseCanditsapplicationindegumming0f0i

3、lYUZhen-zhen，RUILi-lian，LIANGLi，CHANGMing，WANGXing-guo(InstituteofAgriculturalProductProcessing。JiangsuAcademyofAgriculturalSciences，450001，Jiangsu，China)Abstract：ThephospholipaseCgene(S．a-plc)fromStaphylococcusaureuswasclonedandexpressedinE．coliBL21(DE3)．The

4、optimumconditionofenzymeexpressionwasdetermined．theactivityoftherecombinantphospholipaseCcanreached47．4U／mLwhenculturedat30℃for10hourswith0．001mmol／LIPTG．ThedegummingofcrudesoybeanoilwascarriedoutwiththerecombinantPLC，andtheoptimumconditionsweredeterminedasfo

5、llows：50℃，pH4．7，1200U／kgoil，reactiontime2h．Undersuchconditions，theresidualphosphoruscontentindegummedoildecreasedto3．5mg／kg，whichcantotallyfulfilltherequirementofthephysicalrefine．TheexpressionoftherecombinantPLCfromStaphylococcusaureusanditsapplicationindegu

6、mmingcanprovideatheoreticalsupportforthedevelopmentofenzymaticdegumminginedibleoilindustry．Keywords：phospholipaseC；Staphylococcusaureus；recombinantexpression；crudesoybeanoil；degumming中图分类号：TS201．2+5文献标识码：A文章编号：1008—9578(2014)04—00l0—05磷脂酶C(PLC)是一种专一作用于甘油磷脂c3a

7、ureus)中最主要的致病因子之一，是一种镁依赖性酯位上甘油磷酸酯键的脂类水解酶，生成同为油脂成分酶，具有磷脂酶C活性(以下简称磷脂酶C)，最适水的甘油二酯(DAG)及磷脂化合物(磷酸胆碱、磷酸乙解底物是卵磷脂和鞘磷脂。本研究通过大肠杆菌克隆醇胺或磷酸肌醇等)。使用PLC进行酶法脱胶，具有表达金黄色葡萄球菌的磷脂酶c基因，并对大豆毛油适用性广、反应条件温和、生产中节省酸碱化学品的进行脱胶研究，为开发适合我国油脂加工工业的油脂消耗、几乎不产生皂脚和废水等优点，跟化学脱胶相脱胶酶制剂提供了理论依据。比，精炼率可至少提

8、高1％，环保、经济。和其他磷脂1材料与方法酶，如磷脂酶A(PLA)酶法脱胶技术相比，PLC酶法1．1材料与仪器脱胶不仅可以缩短脱胶时间，而且DAG的生成既能金黄色葡萄球菌StaphylococcusaureusATCC6538：提升油品营养价值又能提高毛油的精炼率。2006年，广东微生物菌种保藏中心；大肠杆菌(Escherichiacoli)孟庆飞等⋯进行了PLC水解大豆