金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体的制备.pdf

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1、2012年12月甘肃农业大学学报第47卷第6期1～5JOURNAIOFGANSUAGRICULTURAlUNIVERSITY双月刊金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体的制备彭洪江，杜惠芬，李克生，马卫静杜丽娟，袁明，连晓雯(1．甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070；2．甘肃省医学科学研究院医学生物中心，甘肃兰州730050)摘要：为获得稳定性好、特异性强、效价较高的抗金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体，用热灭活的金黄色葡萄球菌wol一04菌体抗原免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2／0)融合，以金黄色葡萄

2、球菌蛋白A(SPA)为筛选抗原进行克隆筛选，并对各株单抗的生物学特性进行分析和鉴定．结果表明：试验获得了3株稳定分泌SPA单克隆抗体的杂交瘤细胞，其中单克隆抗体3BII、4F7为SPA表面抗原表位的单克隆抗体，与金黄色葡萄球菌wol一04菌体和SPA有较强的免疫反应性，免疫球蛋白亚类分别为IgG1和IgG3，具有稳定性好、特异性强、效价较高的特点．关键词：金黄色葡萄球菌蛋白A；单克隆抗体；杂交瘤细胞；间接ELISA中图分类号：S852．6文献标志码：A文章编号：1003—4315(2012)06—0001—05Monoclona

3、lantibodiesproductionagainstSZoc0aureusproteinAPENGHong-jiang，DUHui—fen，LIKe-sheng，MAWei-jing，DULi-juan~，YUANMing．LIANXiao—wed(1．CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Ianzhou730070，China；2．CenterofMedicalBiotechnology，GansuAcademyofMedicalSciences，L

4、a~hou730050，China)Abstract：Inordertoproducemonoclonalantibodies(McAbs)againstStaphylococcusaureusproteinA(SPA)，hybridomacellswereobtainedbyfusionofmyelomacellswithlymphocytesfromBALB／cmiceim—munizedwithheat—killedS．aureuscells．PositivecloneswereselectedusingindirectE

5、LISAwithS．aureusandSPAasantigens．TheresultsshowedthatsixMcAbsspecificforSPAofS．aureuswereobtained．TwoofMcAbs，3Blland4F7wereprovedtobespecificandagglutinatedS．aureuswol一04cellswel1．TheywereIgG1andIgG3subtype，withhighspecificity，stabilityandtiter．Keywords：Staphylococcu

6、saureusproteinA；monoclonalantibodies；hybridomacells；indirectELISA金黄色葡萄球菌(S口^0f0ccsaureus)是一监控是世界性卫生问题．金黄色葡萄球菌检测技术种常见的引起食物中毒的主要病原菌，广泛存在于繁多，其中以免疫学方法最为常用，而制备针对金黄自然环境中[．金黄色葡萄球菌对食品的污染极其色葡萄球菌的单克隆抗体是各种免疫检测方法的基常见，每年由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病例础．葡萄球菌A蛋白(Staphylococcalaureuspro—仅次于沙门氏菌，金

7、黄色葡萄球菌在食物中的检测teinA，SPA)是细胞壁抗原的主要成分，大约9O第一作者：彭洪~(1986一)，男，硕士研究生，研究方向为兽医微生物与免疫．E-mail：jianNustdo@126．corn通信作者：李克生，男，博士，研究员，研究方向为兽医微生物与免疫．E-mail：LksEm@sohu．com基金项目：甘肃省科教兴省省长基金(GS024一A43021)．收稿日期：2012—01—09；修回日期：2012—04—052甘肃农业大学学报以上的葡萄菌株均含有这种成分，且蛋白功能区高腹股沟皮下、背颈部皮下、足垫多点注射

8、免疫，每只度保守

9、3]．因此制备高特异性的抗SPA的单克隆抗小鼠注射0．2mL(菌量约10。cfu／只)，间隔3周后体，是诊断和检测食品中是否含有金黄色葡萄球菌用弗氏不完全佐剂使用同样方法加强免疫2次，抗的有效途径．鉴于此，本试验研究了如何制备高特异原浓度每次加