金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrD的原核表达及抗体制备.pdf

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1、动物医学进展。2015，36(3)：1-5ProgressinVeterinaryMedicine笞祭劫嗓研究论文＆髫《金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrD的原核表达及抗体制备杜欣军，王学连，李萍，耿洁洁，张洪娟，王硕(天津科技大学食品工程与生物技术学院，食品营养与安全教育部重点实验室，天津300457)摘要：根据金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrD基因序列设计特异性引物，以金黄色葡萄球菌标准菌株基因组为模板进行PCR扩增，获得了大小为2043bp的基因片段。将基因片段连接至表达载体pET26b，转入大肠埃希茵BL21(

2、DE3)中用IPTG诱导表达。SDs_PAGE结果表明，SdrD基因获得了较好的表达，重组蛋白的分子质量约为99ku。利用免疫亲和层析对目标蛋白进行纯化，获得了纯度较高的目标蛋白。用该蛋白免疫新西兰白兔制备了多克隆抗体，抗体效价达到1：23000，为金黄色葡萄球菌基因工程疫苗的开发与性能评价，以及该致病菌免疫检测技术的开发奠定了基础。关键词：金黄色葡萄球菌；表面蛋白；SdrD基因；重组表达；抗体制备中图分类号：$852．611；$852．4文献标识码：A文章编号：1007—5O38(2O15)O3—0001—

3、05奶牛乳房炎(Mastitis)在世界各国都是影响牛成，分别为sdrC(2．8bp)、SdrD(3．9bp)和sdrE奶生产的最为重要的疾病之一【_1]，也是造成经济损(3．5bp)_6]。虽然SabatA等研究表明并不是所失最多的一种疾病，全球每年因乳房炎造成的损失有的金黄色葡萄球菌菌株都含有sdrC、SdrD和约为350亿美元L2]。近年来，我国奶牛产业发展迅sdrE基因，但是很多研究表明该类蛋白能够起到较速，但是由于技术水平、养殖条件等方面的限制，我好的免疫保护作用。Stranger—JonesYK等

4、]研究国因乳房炎造成的经济损失约100亿元l_3]。金黄色发现，用IsdA、IsdB、SdrD和SdrE蛋白免疫小鼠能葡萄球菌是引起奶牛乳房炎最常见的致病菌之一，够获得很强的免疫应答反应，4种表面蛋白制备的可直接影响奶牛的产奶量、奶品质，最终造成奶品质复合疫苗能够产生很高水平的保护作用。Becherel—低下，甚至弃用，并因为投入巨大的医疗费用而造成liM等[8]研究指出，3种Sdr蛋白(SdrC、SdrD和经济损失[4]。金黄色葡萄球菌已成为阻碍奶牛业发SdrE)的保守结构域CnaBE3(thethirdB

5、repeatof展的一种重要危害因素。SdrE)对于金黄色葡萄球菌的感染具有明显的免疫保护作用。此外，TradSJ等_9研究指出，SdrD基金黄色葡萄球菌含有多种表面蛋白，如凝集因子A(clumpingfactorA，ClfA)、凝集因子B(clum—因与骨感染有很大的关系。以上研究表明，SdrD是pingfactorB，ClfB)、胶原结合蛋白(collagenadhe—一种重要的金黄色葡萄球菌表面蛋白，该蛋白在基因工程疫苗开发、检测技术建立及金黄色葡萄球菌sion，Cna)、纤连蛋白结合蛋白A(fibro

6、nectin—bind—致病机制的深入研究方面都具有重要的价值。ingproteinA，FnBPA)、纤连蛋白结合蛋白B(fi—bronectin-bindingproteinB，FnBPB)、铁调节表面本研究克隆了SdrD基因，对该基因进行了原核表达，并制备了多克隆抗体，为金黄色葡萄球菌保护决定子A(iron—regulatedsurfaceproteinA，IsdA)、性疫苗的开发、免疫检测技术的建立奠定了基础。铁调节表面决定子B(iron—regulatedsurfaceproteinB，IsdB)、丝

7、氨酸一天冬氨酸重复蛋白家族(serine-as—l材料与方法partaterepeat—containingprotein，Sdr)等[5]。Sdr蛋1．1材料白家族是识别细胞外基质分子的微生物表面组分，金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923、其名称的由来是因为其R区基因能够编码包含多ATCC49521、ATCC55804、ATCC49525，ATCC公个丝氨酸一天冬氨酸的多肽。Sdr基因簇由3部分组司产品；金黄色葡萄球菌地方分离菌株由本实验室收稿日期：2014—07—11基金项目：“十二五”农村领域国家科

8、技计划项目(2012BAD29B02)；教育部科学技术研究重点项目(212009)作者简介：杜欣军(1978一)，男，山东临沂人，教授，博士，主要从事致病微生物研究。*通讯作者4动物医学进展2015年第36卷第3期(总第261期)显著优势。本研究选择了成熟、稳定的pET系列表l16．0kⅡ达载体，较好的满足了基因疫苗制备的要求，是一种66．2ku具有推广应用潜力的制备方式。45．0ku在原核表达体系