鼠钙网蛋白单克隆抗体的制备.pdf

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1、中国药理通讯2011年第二十八卷第二期癌EC一109细胞株、人结肠癌HCT一8细胞株和人肝癌SMMC-7701细胞株的生长抑制作用，实验设生理盐水对照组、浓度分别为0．2、1、5、25、50、100、200、400、800t~g／ml的CBMC实验组和相同浓度梯度的MMC溶液组(CBMC组剂量按含MMC的量计)。结果：球磨悬浮沉淀法制备的ACNP颗粒大小均匀、形状规则、近似球状、表面光滑，平均粒径为60±20nm；紫外可见分光光度计全波长扫描结果显示，MMC在217nm和365nm吸收较强，且在365n

2、m处吸收较为稳定，故实验中选择MMC的测定波长为365nm。在0．1—20mg／L的浓度范围内，MMC的吸光度A与其浓度C呈直线正相关，回归方程为A一0．00421+0．06591C(r一0．99987，P<0．0001)。在25℃时，25min左右ACNP吸附MMC达到平衡状态，且随着时问的延长吸附量不再发生明显变化；室温条件下，所得等温方程式为C／X=-0．0123+0．00506C(r一0．99916，P-40．0001)，ACNP对MMC的饱和吸附量Xm199．63mg／g。lgACNP吸附19

3、9．63mgMMC达到饱和。故配制CBMC时MMC与ACNP质量比为1：5。CBMC体外释放实验结果显示，MMC对照组8h累积释放量为989／6，CBMC释放28d累积释放量为7O．15，缓释效果明显。体外细胞实验中，与阴性对照组相比，对于所选取的四种细胞，含有相同剂量MMC的CBMC组与单纯使用MMC组抑瘤率相比，抑瘤效果明显，结果具有统计学意义，各组之间的统计结果P值大都维持在0．001以下，ACNP组与阴性对照组相比抑瘤率均没有显著性差异。结论；本实验室通过球磨悬浮沉淀法制备出的活性炭纳米粒子与市

4、售的相比，颗粒小且均匀，质量可控，可批量生产；MMC与ACNP最佳混合吸附配比为1：5，吸附时间为25min；CBMC具有明显的缓释效应，突释效应不明显；含有相同剂量MMC的CBMC体外对人胃癌BGC一823细胞株、人食管癌EC一109细胞株、人结肠癌HCT一8细胞株和人肝癌SMMC-7701细胞株的抑制作用均好于单独使用MMC，活性炭本身没有杀伤细胞的作用，但可显著增强MMC的体外抑制细胞生长的作用。鼠钙网蛋白单克隆抗体的制备汪龚泽刘朝奇三峡大学分子生物学研究所湖北宜昌443002钙网蛋白(Calre

5、ticulin，CRT)是高度保守，普遍存在于哺乳动物细胞中的Ca储存蛋白，位于内质网腔中，具有调节细胞凋亡、应激、心血管炎症反应等多种生理和病理生理过程的多功能蛋白。最新研究发现，当细胞发生凋亡时，膜表面CRT分子增多、聚集成簇，成为凋亡细胞的“吞噬我”信号，启动吞噬、清除凋亡细胞被的过程。经提取蛋白质研究发现凋亡细胞表面的CRT主要为其保守序列，也即钙网蛋白的N、P段。依此我们通过PCR克隆小鼠的N、P段序列并将该段构建到PET一28a(+)中，表达融合his标签的融合蛋白纯化后免疫小鼠制备单克隆抗

6、体。三次免疫后取脾与杂交瘤细胞SP20融合筛选抗小鼠CRT的单克隆抗体株，命名为7C3．获得的单克隆株分泌的抗体经ELISA测定其效价为64万，并经Westerblot鉴定制备的单克隆抗体不仅能过特异性的识别原核和真核鼠的CRT，同时能识别人、猴、鸡、鸭、鱼、36中国药理通讯2011年第二十八卷第二期牛和狗的CRT蛋白。同时我们应用化疗药物米托蒽醌诱导小鼠黑色素瘤BI6细胞，小鼠淋巴瘤细胞EL4细胞CRT外翻，并本别通过免疫荧光和流式细胞术观察BI6和EL4的CRT的膜表达情况，结果显示制备的单克隆抗体

7、能过识别由化疗药物诱导的膜外翻的CRT。由此，我们可以得出结论我们制备了小鼠的钙网蛋白的单克隆株，制备的单克隆抗体能应用于Westerblot、ELISA、免疫荧光、和流式；并且由于我们制备的单克隆抗体特异性的识别钙网蛋白的免疫调节活性区，因此我们相信该单克隆抗体能够很好的应用于抗肿瘤的研究，并可能成为一种特异性抗肿瘤靶向药物。BC1—2家族在阿司匹林诱导宫颈癌Caski细胞凋亡中的作用杨建林韩钰周永芹张伟三峡大学分子生物学研究所宜昌443002目的：阿司匹林(acetysalicylicacid，AS

8、A)，又名乙酰水杨酸，是非甾体类抗炎药(NSAIDs)的代表药物，主要通过抑制环氧化酶(COXs)的活性进而降低前列腺素(PGs)的产生发挥作用。文献报道阿司匹林对肿瘤细胞的生长有抑制作用，可以抑制食管癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、淋巴瘤以及子宫内膜癌的生长；普通抗炎抗风湿用的阿司匹林应用在半年以上，可有效降低宫颈癌的发病率。最近流行病学研究证实，阿司匹林及其它非甾体类消炎药具有降低肿瘤发病率的作用，减少PGE2的产生，恢复