肝素对金黄色葡萄球菌与血浆蛋白间粘附的阻断作用.pdf

《肝素对金黄色葡萄球菌与血浆蛋白间粘附的阻断作用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第33卷第4期东北电力大学学报V01．33．No．42013年8月JournalOfNortheastDianliUniversityAug．，2013文章编号：1005—2992(2013)04—0060—04肝素对金黄色葡萄球菌与血浆蛋白间粘附的阻断作用郑胜，张月明，邹姗姗，钱院红，舒传业，易景，唐同同，张羽汐(东北电力大学化学工程学院，吉林吉林132012)摘要：金黄色葡萄球菌与宿主细胞粘附是其感染的先决条件。若能阻断粘附环节，金黄色葡萄球菌将无法生长繁殖，即可降低由其引发的疾病的发病率。本研究采用静止粘附技术等实验手段，研

2、究肝素对金黄色葡萄球菌与血浆蛋白粘附的阻断。结果显示，当肝素溶液浓度<1．0mg／mL时，肝素以浓度依赖的方式阻断。金黄色葡萄球菌粘附血浆蛋白后，淋巴细胞对其吞噬作用减弱；加入肝素后，吞噬作用的强度增强。结果暗示，肝素能够阻断金黄色葡萄球菌与血浆蛋白的粘附，可以作为临床药物开发的靶点。关键词：金黄色葡萄球菌；粘附；肝素；阻断；吞噬中图分类号：X703．1文献标识码：A金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，金葡菌)是人和动物化脓感染中最常见的病原菌，可引起一系列不同程度的感染。一个不太严重的伤口若感染金黄色葡萄球

3、菌，则极有可能发展为恶性的败血症、骨髓炎、脓毒性关节炎或心内膜炎等⋯。金黄色葡萄球菌更是医院感染中最常见的病原菌之一。据估计，约有0．5％～1．5％的器官移植病人会受此菌感染，在某些情况下这个比率甚至会更高J。近年来，报告金黄色葡萄球菌感染的病例不断增加，在世界范围内，葡萄球菌株的耐药性日趋严重，给治疗带来一定的困难，因而当前迫切需要寻求新的抗生素以防治金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌通过表面的粘附素与宿主的细胞外基质发生特定的相互作用，是其感染的先决条件。若能阻断粘附环节，细菌将无法定居和繁殖，从而不能产生和释放胞外酶和外毒素，即

4、可降低由其引发的疾病的发病率J。本研究的目的是通过静止粘附技术的实验手段，研究肝素对金黄色葡萄球菌与血浆蛋白粘附作用的阻断，以及肝素对淋巴细胞吞噬作用的影响。以期寻找防治金黄色葡萄球菌感染的新途径，为抗金黄色葡萄球菌感染药物的开发奠定基础。1材料与方法1．1实验动物及血浆蛋白和淋巴细胞的分离1．1．1血浆蛋白的分离取ICR小鼠(购自吉林大学动物中心)，麻醉后采用眼眶采血法取血3mL，按7：1的比例加入柠檬酸抗凝剂，混合均匀后置于离心机中，以1500rpm的转速离心20min，离心后将上层血清转移至新的离收稿日期：2013一O1—1

5、4基金项目：吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(吉教科合字[2011]第74号)作者简介：郑胜(1979一)，男，山东省泰安市人，东北电力大学化学工程学院副教授博士，主要研究方向：生物医药、生物能源研发．第4期郑胜等：肝素对金黄色葡萄球菌与血浆蛋白间粘附的阻断作用61心管中，置于4冰箱中保存备用。1．1．2淋巴细胞的分离将八层纱布置于培养皿中，用PBS充分浸润，取小鼠脾脏用纱布包好后将其充分捣碎。取出纱布沥干，将培养皿中的液体转移至干净的离心管中，以1500rpm的转速离心10min。离心后弃上清液，用适量PBS将沉淀重悬，再

6、以1500rpm的转速离心10min，如此反复两次。最后将沉淀的淋巴细胞以适量PBS重悬，重悬均匀后分装至几只干净的离心管中，置于4℃冰箱中保存备用即可。1．2金黄色葡萄球菌菌液的制备取金黄色葡萄球菌菌株斜面培养物接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃、1500rpm振荡培养3～4h。3～4h后，采用显微镜直接计数法对菌液进行计数，将菌液浓度调整至(10～100)×10个／ml，即血细胞计数板上平均每一大格的菌落数目为l0～100个。置4cc冰箱保存备用。1．3肝素对粘附作用的阻断及最适作用浓度的确定(1)取16只载玻片，任取其中

7、2只编号①，各滴加30txLPBS做空白对照；其余14只随机分成7组，编号②一⑧，分别滴加30血浆蛋白溶液，滴好后置于4℃冰箱中过夜粘附；(2)次日，取适量金黄色葡萄球菌菌液分别与PBS、1．0,0．9、0．7、0．5、0．3、0．1mg／mL肝素溶液按9：1的比例混合，分别编号菌液A—G，混合均匀后置于37℃恒温培养箱中孵育30min；(3)30min后从4℃冰箱中取出载玻片，用滤纸吸去未粘附在载玻片上的PBS和血浆蛋白溶液，①～②号滴加足量的菌液A，③一⑧依次滴加足量的菌液B—G，使菌液充分覆盖住载玻片上残留的PBS和血浆蛋白

8、溶液。将全部载玻片重新移至37℃恒温培养箱中孵育30min；(4)30min后将试样全部取出，用PBS将载玻片上的未粘附菌冲掉，镜检计数。粘附固定的菌落数目越少，说明阻断作用越明显。1．4肝素对淋巴细胞吞噬作用的影响(1)取4只干净的离心管，编号①