大黄素对金黄色葡萄球菌抑制作用的蛋白质组学研研究

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2、或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)肾篓琴孝獠秽嗽q摘要目的：金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，简称金葡菌)是一种严重的条件致病菌。临床分离的耐甲氧西林金葡菌具有多重耐药性。本研究的主要目的是确证大黄素对金葡菌的抑制效果，并进一步利用比较蛋白质组学方法探讨大黄素对金葡菌敏感菌株(methicillin—sensitiveStaph)，lococcusaureus，MSSA)和多重耐药菌株(Multi．drugresistantStaphylococcusaureus，MRSA)的作用机制。方法：①采用体外抑菌实

3、验方法研究大黄素对临床分离的多种耐药金葡菌(编号MRSAl33630)的最小抑菌浓度(theminimuminhibitoryconcentration，MIC)，在大黄素0．25×MIC影响下，连续24小时测金黄色葡萄球菌的OD595值，描绘细菌生长曲线，对金葡菌的蛋白质表达谱进行SDS．PAGE分析；②应用同位素标记相对和绝对定量与高效液相色谱及质谱联用(iTRAQ．LC．MS／MS)的高通量蛋白质生物质谱技术研究大黄素作用后金葡菌蛋白谱表达的改变，结合生物信息学方法，从差异表达蛋白中寻找大黄素可能影响的代谢通路或靶点。结果：①大黄素对金黄色葡萄球菌有良好抑菌作

4、用，其对MSSAATCC29213和MRSAl33630的MIC分别为0．19lag／mL、15．98Ltg／mL；②大黄素抑制MSSA和MRSA的生长，并影响细菌蛋白质的表达；③MRSA对照组和MSSA对照组相比，表达量变化1．5倍以上的蛋白共349个，其中一h调蛋白162个，下调蛋白187个，差异表达(上下调1．5倍，且P<0．05)的蛋白107个，主要分布在糖代谢／糖异生、丙酮酸代谢，毒力蛋白表达以及ABC转运系统等途径；④MSSA药物组和MSSA对照组比较，表达量变化1．5倍以上的蛋白共200个，上调69个，下调131个，差异表达蛋白49个，主要是丙酮酸代谢

5、途径的催化酶或关键酶，部分是金葡菌毒力因子和氧化应激系统等相关蛋白；⑤MRSA药物组和MRSA对照组比较，表达量变化1．5倍以上的蛋白共158个，上调58个，下调100个；差异表达的蛋白32个，主要涉及糖代谢、蛋白质降解、氧化应激以及毒力因子表达等多个途径。结论：本课题通过体外抗菌实验发现大黄素对金葡菌抑菌效果显著。MSSA和MRSA的蛋白质谱存在显著差异。MRSA在糖代谢、毒力因子表达和转运系统方面有别于MSSA，说明MRSA的多重耐药是多个因素综合的结果。lip、sspB、atl、CapG和PrsA受大黄素影响表达显著下调，可能是MRSA的耐药靶点；组氨酸激酶可

6、能是人黄素抗金葡菌的作用靶点，但要确认尚需要进一步的实验支持。关键词：大黄素；抗菌作用机制；金黄色葡萄球菌；iTRAQ—LC．MS／MSInvestigationsintothefunctionalmechanismofEmodinagainstStap伽,lococcusa1．1Fel／lSusingiTRAQ·-LC·-MS／MSproteomicanalysisSpeciality：PharmaceuticalanalysisAuthor：PengYuanxiaTiutor：XuHuiobjeetiveAbstractStaphyJ,lococcusaureu

7、s(SA)isaseriouspathogenassociatedwithsevereinfectionandtheclinicmethicillin,-resistantisolatesarealmostlymultidrugresistantStaphylococcusaureus(MRSA)．TheaimofthepresentstudywastoconfirmtheinhibitoryactivityofemodinagainstSAandexplorethefunctionalmechanismthereof．Methods①Amicro一．twofo