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《乙型肝炎表面抗原cDNA在大肠杆菌中的表达.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、协产气端各一&用限制性内切酶∗−七8段非编码顺序乙型肝炎表面抗原/,!∀在把其中的!∀切出并抽提出来用,∀9%8,连上大肠杆菌中的表达核酸酶进行部分水解酚抽提后:/6;8,−∀接头选保留万,.起始编码的菌株质粒待何葆光黄培仁用&#卫生部上海生物制品研究所∃、4<,是一个含乳糖启动子只有一个黎志来/:/6;8切点并已验明在此切点连上已知!∀#美国休斯敦贝勒医学院∃&−/后能进行表达的质粒把+,∀.!∀接在,乙型肝炎病毒!∀是环状的长度为,4<,的:/6;8切位克隆入大肠杆菌;;8&&%∋()∗在克隆化并搞清乙型肝炎表面抗原,,用中
2、选出四环素抗性菌株缺口翻译法把−/,,#+,∀.∃及核心抗原#+,∀.∃的编码顺序后+,−∀./!∀标上”甲作为探针经菌落原&/‘许多实验室分别进行了表达的实验+,∀.,选从3,位杂交筛出阳性菌株%’顺接的一&−在大肠杆菌中的表达一直较顺利但+,∀.,−∀批菌株进行表达实验表达产物+,.用酶则,相反即使用很强的启动子也很难得到满意联免疫吸附分析试验#:987∀∃及放射免疫&&的表达+,−的分子量为∋0111左右但#;8∀∃测定的结果大多,∀.阴性个别菌株有时可&迄今所报告的表达产物分子量均超过此数以出现阳性用习唱一甲硫氨酸标记表达菌株
3、的,,−#021112%3111∃为+,与细菌酶的杂合,用∀.新生蛋白质后==聚丙烯酞胺电泳测定其&〔2−/蛋白司我们用+,∀.互补!∀#!∀∃,分子量在参入率很高的情况下观察到有分子,试验在大肠杆菌中的表达也不顺利但观察到量为∋0111左右的蛋白质能被豚鼠抗+,6∀.,∋0111在参入率很高的情况下有分子量为左,及羊抗豚鼠烤>双抗体所沉淀#图2∃与对&右的+,−∀.出现照的正常豚鼠血清沉淀物或其他菌株显著不,6/,45+,是含+,∀.!∀的质粒此同,为目前所报导的+−∀.在大肠,杆菌中表/−&!∀含有+,纯全部编码顺序及%’3’两达
4、产物分子量与天然蛋白最接近的一个很可能不是杂合蛋白而是单纯的+,−∀.,造成这−种现象的原因可能是+,∀.基因在大肠杆菌,&中的表达产物不稳定在参入率很高的情况,−,下生成+,绳的速度大于被水解的速度故可&当生成的速度小于破坏速度被观察到&时,7+,∀.就检测不出来此外在大肠杆菌−,中生成的+,∀.不能被糖化也不易形成多&聚体,也是它不易被检出的原因关于表达的&ΑΒ不稳定性在:?≅等ΧΔΕ的实验中也曾观察到−/本文说明+,吨!∀经过适当的改,利造用大肠杆菌的启动子还是可以单独表达2,,∀.一77图大肠杆菌产生+蛋白的聚丙烯酞胺的&凝胶
5、电泳放射自显影图&,ΑΒ&&&,,2朋性菌溶菌上清加正豚血清2:?≅5ΓΑΔΓΗ介∋Ι22Ι=2∃31%Χ〕!Α#&,&&,&&&,∋阴性菌溶菌上清加豚抗+玩∋Ε5ϑΑΚΒ∗ΓΑΔ尸犷明人贾七ΛΜ阳2∋Ν2Ι=2∃Χ盯#&,%阳性表达菌溶菌上清加豚抗+,−==0&阳性表达菌落菌上清加正豚血清,3&阴性表达菌溶菌上清,Φ&阳性表达菌溶菌上清&Ν卷Φ期确多余春平均压变0%Οϑϑ∗ΑΓΜΓΜ−,−ΗΑΒΓΜ.ΒΚΠΑ,#+,−∀.∃!∀6ΒΓΑΜ址Β.Γϑ6≅∗ΔΓ≅≅∋1/6−ΗΒ,−Α6Α掩击Β
6、.ΘΔΜ.Γ?ΓΓϑ9ΡΑ∗Κ6≅6Γ6ΚΜΒΑ∗ΔΑ。面?ΑΓΓϑΚΜ.ϑΓ&Α?6ΚΜΒΓΑΓΜ6Β)Σ:;8ΔΜΒ(ΚϑΜ≅ΚΜ)56Οϑ&‘Α−ΜΒΗ−6Κ6”!∀ΡΓΔ?ΓΓΚΑΒ−Π6≅:5Δ图2电针足三里穴对刺激下丘脑引起&的升压反应的抑制作用;;8Τ∗Κ−−Μ6Β6Π+,−∀.ΡΑ−Οϑ各柱的高度示刺激下丘脑时平均动脉压升高的幅度&,%3&空白柱为对照组#ΒΩ21∃ΓΓ?)Σ3一ΓϑΜ6ΒΜΒΜΒ66ΚΑΓΜ6Β#均值和标准误∃斜线?Κ4&,,≅ΒΩ2∋∃Α)Ξ/?柱为电针组
7、#为电针前对照为Κ−Η−6−−,ΔΓϑ?ΓϑΤ∗Κ−?+,∀.Ξ21ΟϑΡ电针21分和∋1分时Ψ分别为停止电针后,,,&∋1%10131和Φ1‘,)∃ϑΑ−Α6ΑΚΜ.ϑΓ6,ΑΒ分时表示和对照值#≅ΔΗΔΡΠ∋0111?&&相比较∗Ζ11223ΛΚΣ/Δ6−Γ6Γϑ≅6ΔΗΔΑΚΜΓΥ.ϑ6ΒΑΓΜ−&&ΠΓϑς+,∀.停止电针后仍维持一段时间#图2∃在电针对,#Μ6−Α年Ν月∋∋日收到∃防御反应的抑制效应出现后静脉注射纳洛酮#1&0毫克[公斤体重∃可翻转这种抑制效应&电&针前先给予纳洛酮则可阻断
8、电针的抑制作用电针对防御反应的抑制作用提示电针对防御反应的抑制过程中有内啡肤参&,孙祥莺姚泰与在进一步的实验中先将下丘脑基底部包,#上海第一医学院∃括弓状核在内的区域作局部损毁然后再重复&,〔王〕,用电刺激坐骨上述观察则
