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1、·236·中国免疫学杂志2001年第17卷乙型肝炎病毒表面抗原M蛋白真核表达细胞株的建立①及其表达产物的检测何 芳 秦 山 赵连三 刘 丽 (华西医科大学附一院肝炎研究室,成都610041) 中国图书分类号 R37312 文献标识码 A 文章编号 10002484X(2001)0520236204摘 要 目的:建立乙型肝炎病毒表面抗原M蛋白的单克隆真核表达细胞株。方法:利用磷酸钙法将前期所构建的质粒pRc/CMV2S2S导入小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,用G418抗性筛选以获得单克隆细胞株,用点免疫、ELISA、Western印迹法分别检测目的蛋白
2、的表达情况。结果:获得4株具有G418抗性的单克隆细胞株SP2/02S2S,且在转染细胞株中检出了乙肝病毒表面抗原,优化了该过程中的实验条件。结论:建立了乙型肝炎病毒表面抗原M蛋白的单克隆真核表达细胞株。关键词 乙肝病毒 M蛋白 单克隆细胞ConstructionofmonoclonecelllinesofSP2/02S2SanddetectionoftheirexpressionHEFang,QINShan,ZHAOLian2Sanetal.ViralHepatitisResearchUnit,1stUniversityHospital,WestC
3、hinaUniversityofMedicalSciences,Chengdu610041AbstractObjective:ToconstructamonoclonecelllineexpressingM2HBsAg.Methods:TransfectedSP2/0withpRc/CMV2S2SbyCal2ciumPhosphateMethod,selectedthecellsbyG418,detectedHBsAgbyDot2blot、ELISAandWestern2blothybridization.Results:ByselectionofG
4、418,G418resistentcellswereobtained;testsofWestern2blothybridizationandELISAdemonstratedtheirexpressionofaimedprotein.Con2clusion:MonocloneCellLinesofSP2/02S2Swereobtained.KeywordsHepatitisBvirusM2HBsAgMonoclonecell 乙型肝炎对我国人民健康危害极为严重,目前11111 质粒 pRc/CMV2S2S由本室构建,系将乙肝1尚无满意的抗病毒治疗手
5、段。对乙型肝炎发病机病毒(HBV)的前S22S基因片段插入真核细胞表达质理及抗病毒治疗的基础研究十分重要,而这些研究粒Rc/CMV(购自美国Invitrogen公司)的CMV立即常需要乙型肝炎病毒抗原的真核表达系统作为其必早期启动子下游后所构建的哺乳动物表达质粒,该要的手段。我们曾经建立了乙肝病毒表面抗原S蛋质粒带有Neo基因。2白的真核表达细胞株,由于M蛋白(S蛋白+前S211112SP2/0细胞 BALB/c近交系小鼠的骨髓瘤蛋白)中含有在乙型肝炎发病机理中具有重要作用细胞株,由本室提供。的前S2蛋白,本研究建立了乙型肝炎病毒表面抗原11113
6、细胞培养及转染所需试剂 RPMI1640(美国M蛋白真核表达细胞株用于乙肝防治的基础研究。GIBCO公司)、HEPES(德国Roche公司)、G418(美国细胞株选用BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0,经过GIBCO公司)、新生小牛血清(成都华西生化厂)、G418抗性筛选,获得了表面抗原M蛋白真核表达单DNA/CaCl2/BES细胞转染液(含pRc/CMV2S2S20μg、克隆细胞株,本文对其所表达的目的蛋白质进行了0125mol/LCaCl2500μl、pH6196的2×BES500μl,在检测,对所涉及的技术条件进行了讨论。转染之前半小时新鲜
7、配制)、PBS等。11114 培养细胞裂解液 含各1/200体积015mol/1 材料与方法LDTT/215mmol/LEDTA、5mg/mlApotinine,5mg/ml111 材料Leupetine和0.2mol/LPMSF的LAC缓冲液(20mmol/LHEPESpH719,400mmol/LNaCl,1mmol/L①本课题受国家自然科学基金(项目号39670670)、四川省科委九五EDTA,9mmol/LCHAPS,25%甘油)。攻关重大项目及省计委科研基金资助作者简介:何 芳,女,29岁,传染病学博士;11115HBsAg2ELISA试剂
8、盒 购自华美生物工程公秦 山,博士,31岁,讲师,主要从事病毒性肝炎核酸疫苗司,批号:990601。研究;赵
