在线二维柱切换-超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量.pdf

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1、第44卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第5期2016年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry828～832DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．150780在线二维柱切换-超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量刘永利王常顺王晓蕾杨抒楠刘兴国冯丽(河北省药品检验研究院，石家庄050011)(赛默飞世尔科技(中国)有限公司，北京10080)摘要建立了二维柱切换一超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、

2、丹皮酚含量的方法。一维色谱柱为ThermoAccucoreXLCl8(250mm×2．1mm，4m)，二维色谱柱为DIONEXAcclaimphenyl一1(150mm×4．6mm，3tzm)，一维分析流动相为乙腈一水，梯度洗脱，二维分析流动相为乙腈一水，等度洗脱，14．5min进行阀切换；检测波长：0～14．5rain为240nm，14．5～30min为275nm，流速：0．5mL／min，柱温：30℃。30min即可完成明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量测定，并有效地将莫诺苷同分异构体分离。莫诺苷、马

3、钱苷、芍药苷、丹皮酚的线性范围分别为7．6—377mg／L，9．2～459mg／L，8．4～419mg／L和8．2～409mg／L，相关系数为0．9999，加样回收率为98．3％～100．2％。本方法快捷高效，可对控制明目地黄丸质量提供参考。关键词在线二维柱切换一超高效液相色谱法；明目地黄丸；莫诺苷；马钱苷；芍药苷；丹皮酚；同分异构体1引言明目地黄丸由熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、枸杞子、当归、白芍、山药、茯苓、泽泻、菊花、蒺藜、煅石决明等12味药组成，具有滋肾、养肝、明目之功效。方中熟地黄滋补肾阴，填精益髓，为君药，约占处

4、方比例的18％，山药、酒萸肉、煅石决明各占处方的9％，其余8味分别占处方的7％，由于各味药成分复杂，其质量较难控制。《中国药典~2015年版一部分别采用了3种色谱系统测定酒萸肉、白芍、牡丹皮三味药材中所含主要活性成分¨马钱苷、芍药苷和丹皮酚等3种成分的含量，操作费时。由于马钱苷与丹皮酚等成分极性相差较大，文献报道也多采用不同色谱系统进行分离测定J。莫诺苷(CH0)是一种环烯醚萜苷化合物，为酒萸肉的主要活性成分，对缺血性脑损伤具有保护和修复作用，对神经细胞保护作用较强，根据7位的羟基朝向不同，有7和7口两种异构体(图1)

5、，文献对其分析方法研究较少"J。近年来，二维液相色谱技术广泛应用于复杂体系的分离’mJ，大大提高了分离效率，本实验根据测定成分的分子结构特点，采用在线二维柱切换技术，使用了两种不同类型的色谱柱，同时对莫诺苷、马钱苷、芍药苷和丹皮酚进行分析测定，还将莫诺苷两种异构体进行了分离，为更好地控制明目地黄丸的质量，研究其物质基础提供了参考依据。2实验部分2．1仪器与试剂Ultimate3000超高效液相色谱仪，配双三元梯度泵、带有一个十通阀的柱温箱、二极管阵列检测器；AE240电子天平(瑞士Mettler公司)；Integral

6、10Milli—Q超纯水仪(德国Millipore公司)。对照品：莫诺苷(北京市药品检验所提供，批号：201304，含量以100％计)，马钱苷(中国食品药品检定研究院提供，批号：111640-200503)，芍药苷(中国食品药品检定研究院提供，批号：110736．201438，含量以96．4％计)，丹皮酚(中国食品药品检定研究院提供，批号：110708-200505)。试剂：乙腈为色谱纯；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。2015—10-08收稿；2015—12—15接受E-mail：jianyan882@163．cor

7、n830分析化学第44卷图3混合对照品(A)和样品(B)色谱图Fig．3Chromatogramsofreference(A)andsample(B)1：7n一莫诺苷(7a—Morroniside)；2：一莫诺苷(一Morroniside)；3：马钱苷(Loganin)；4：芍药苷(Peoniflorin)；5：丹皮酚(Paeono1)。芍药苷在一维色谱进行分离，在芍药苷出峰后，即切换到二维色谱上对丹皮酚进行分离，最终达到好的分离度与较高的柱效。3．3检测波长的选择分别称取莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚对照品适量，用5

8、0％甲醇配制成适宜浓度的对照品溶液，在200—400nm进行光谱扫描。结果表明，莫诺苷、马钱苷、芍药苷和丹皮酚的最大吸收峰分别位于240，237，230和275nm处。在确保准确测定的基础上，选择240nm作为莫诺苷、马钱苷、芍药苷的测定波长，275nm作为丹皮酚的测定波长。3．4方法学考察3．4．1标准曲线的制备分别准确移取2．