高效液相色谱法测定乳宁丸中芍药苷含量.doc

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1、高效液相色谱法测定乳宁丸中芍药苷含量【关键词】乳宁丸芍药苷色谱法高压液相　　乳宁丸是由赤芍、浙贝母、当归等12味中药材细粉及中药材提取物制成的丸剂。具有舒肝活血，软坚散结之功效，用于治疗乳房胀痛有块，月经不调或量少，色紫成块及乳腺增生。为了控制乳宁丸的质量，保证临床用药效果，本实验以芍药苷为指标，采用高效液相色谱法测定其含量，结果较为满意。　　1实验材料　　Aglient1100高效液相色谱仪，G1314A紫外线测器，77251手动进样器，浙大N2000色谱数据工作站；芍药苷化学对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号:110736200321

2、规格：供含量测定)；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：ReliaSilC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相：乙腈—0.1%磷酸(13：87)；流速:0.7mL/min;检测波长：233nm;柱温：室温。　　2.2对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品6.25mg，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1mL,置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL含0.25mg芍药苷)。　　2.3供试品溶液的制备取本品2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100mL,称

3、定重量，放置2h，超声处理1h，冷却至室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液20mL，置于100mL溶量瓶中，用甲醇定容，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。　　2.4阴性对照品溶液的制备取缺赤芍的样品2.0g，照供试品溶液的制备项下同法操作，即得。　　2.5线性关系考察精密吸取芍药苷对照品溶液(0.25mg/mL)2、4、6、8、10μL分别注入液相色谱仪，依法测定，根据对照品的峰面积积分值对芍药苷的进样量绘制标准曲线，得回归方程：Y=8.3421×104X＋3.1723×103，r=0.99996。结果表明：芍药苷在0.05

4、～0.25μg之间呈良好的线性关系。　　2.6方法学考察　　2.6.1精密度试验分别吸取5μL的对照品溶液，重复进样5次，测得其峰面积RSD为1.38%。2　　2.6.2稳定性试验精密吸取对照品溶液5μL,于0、2、4、24、36h分别依法测定，结果峰面积RSD为1.03%，芍药苷在30h内结果稳定。　　2.6.3重现性实验精密称取同一批样品5份，按供试品溶液的制备和测试方法测定，结果峰面积RSD为1.74%。　　2.6.4回收率试验精密称取已知样品含量(8.79mg/g)的样品5份，分别加入芍药苷对照品一定量，按正文2.3项下操作，测定并根据样品

5、含量及芍药苷对照品加入量，计算回收率。结果平均回收率为98.96%，RSD为0.8%(n=5)。　　2.7样品测定依法测定040501、040502、0405033批样品，经过多次试验，现本品中芍药苷含量暂定为每克不得低于8.47mg。　　3小结　　3.1流动相考察曾选用流动相为甲醇—0.05mol/L磷酸二氢钾—醋酸—异丙醇(50∶200∶4∶4)，流速为1.0mL/min,但此条件下，样品峰形拖尾，故不予采用。后改为乙腈—0.1%磷酸(13∶87)作为流动相，流速0.7mL/min,此选定条件下，样品中芍药苷分离度好，保留时间适中。故选用乙腈—

6、0.1%磷酸(13∶87)作为流动相，流速0.7mL/min，为芍药苷定量分析的流动相。　　3.2样品检测波长取芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1mL中含芍药苷0.025mg溶液，作为对照品溶液，进行紫外检测。结果选定测定波长λmax=233nm。且溶液、阴性无干扰。本实验建立的高效液相色谱法测定加样回收率高，是一种快速、简便、较准确的方法［12］。【参考文献】　　［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2000:7981.　　［2］郑虎占.中药现代研究与应用［M］.北京:学苑出版社,1997:1102