Kiss-1对结肠癌SW480细胞增殖和迁移的影响.pdf

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1、R574.62UDC61010555~±~{!l~j(.(~~~{it)Kiss-1~~--SW480tlflJJEJtJi.;fult.t$~JJ~11Jf51:::':£M:;g:~§ire11§'~~yrp~36'l{Rf$:~UJ1!~~:&~5¥4..~~1S;f-8:rf{tit*~~C~t4~)11Jf~jj~:¥~1-tl![~~roofiJTft~~:fW$::*:~~-1~'*~~t5J.41~J.t~UNIVERSITYOFSOUTHCHINA~¥i.f~ff!~-=Er%'=51&Jf~J,txtf,1@§:,J¥111§

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5、#~~m•*~1il*x~~~cq:roo~~~x±x••-»·#mtt~~~~~0A~mmAm§o~~~WI¥J?¥:1fli~x,M~n§:iSYfh~rl~o本工作承蒙湖南省教育厅科学研究项目基金(11C1107)资助6Kiss-1对结肠癌SW480细胞增殖和迁移的影响研究生：吴雪艳导师：刘迪群摘要目的:本实验通过构建pEGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒，将其转染至结肠癌SW480细胞株，G418筛选获得稳定表达的细胞株，检测Kiss-1基因对结肠癌SW480细胞增殖及迁移能力的影响，分析其与结肠癌SW480细胞生物学特性的影响，为Kis

6、s-1在结肠癌防治作用提供理论依据。方法:构建pEGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒，通过脂质体转染方法，将Kiss-1基因导入结肠癌SW480细胞，经G418抗性筛选构建稳定转染细胞株，筛选4周后在荧光显微镜下观察细胞转染情况。将SW480细胞设为空白对照组，将转染pEGFP-N1空载体质粒的SW480细胞设为阴性对照组，将转染pEGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒的SW480细胞设为实验组。采用Westernblotting法检测各组细胞中Kiss-1基因编码的蛋白(Kisspeptin)表达量；采用CellCountingKit-8（简

7、称CCK-8）法检测各组细胞的数量，分析Kiss-1对SW480细胞增殖的影响；采用细胞划痕实验(Scratchwoundhealingassay)检测Kiss-1对SW480细胞迁移能力的影响。结果:1.构建pEGFP-N1-Kiss-1重组真核表达质粒，目的基因经BLAST基因测序显示合成序列与GenBank中Kiss-1cDNA序列完全吻合，表明重组质粒构建成功。I2.Lipofectamine2000介导pEGFP-N1和pEGFP-N1-Kiss-1转染结肠癌SW480细胞，经G418抗性筛选，荧光显微镜下观察细胞可见阴性对照组和实验组细胞

8、恒定表达绿色荧光蛋白。结果提示稳定转染细胞株构建成功。3.提取各组细胞的总蛋白，Westernblottin