survivin基因的shrna干扰对结肠癌sw480细胞增殖和凋亡的影响

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1、2010年第37卷第9期国肿瘤临485Survivin基因的shRNA干扰对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响米王学虎傅仲学赵渝谌伟吴星烨王春毅摘要目的：以携带shRNA片段的腺病毒为载体，对结肠癌细胞SW480中Survivin基因的表达进行干扰，研究其对肿瘤细胞中Survivin基因沉默效果及对细胞周期、凋亡和增殖的影响。方法：将构建好的携带Survivin—shRNA片段腺病毒，体外转染结肠癌细胞株SW480。以EGFP为报告基因，采用流式细胞计数测定不同感染复数(MOI)下的转染效率，选取适当病毒浓度进行下一步实验。通过RT—PCR和We

2、sternblot检测基因沉默后结肠癌细胞内SurvivinmRNA和蛋白的表达水平；在AnnexinV-FITC和PI染色后通过流式细胞术检测并分析Survivin基因沉默后细胞周期和凋亡的变化；同时采用噻唑蓝(M1Tr)法、克隆增殖实验对细胞不同时期增殖活性进行观察，明确对细胞增殖的抑制时效性。结果：腺病毒转染后MOI值在0～5O时，剂量与转染效率成~--I,L，确定最佳MOI值为50并进行后续实验；shRNA干扰后细胞内SurvivinmRNA和蛋白表达水平降低，较对照细胞组差异有统计学意义(P

3、胞凋亡率升高，与对照组相比差异有统计学意义(P<0．O1)。同时基因沉默后，细胞周期也有明显变化，表现为G／s期细胞增多和GJM期细胞减少，与对照细胞组相比差异有统计学意义(P

4、rvivinRNA干扰增殖凋亡结肠癌doi：10．3969／j．issn．1O00—8179．2010．09．002InfluenceoftheSurvivinGeneontheProliferationandApoptosisofColonCarcinomaCellsWANGXuehu，FUZhongxue，ZHAOYu，SHENWei，WUXingye，WANGChunyiCorrespondingauthorFUZhongxue，E-mail：fzx990521@sina．comDepartmentofGeneralSurgery，First

5、AfiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016，ChinaGrantsupport：NationalNaturalScienceFoundationofChina(30772547)andDoctoralFundofMinistryofEducationofChi—na(20060631013)Abstract0bjective：Toevaluatetheinterferenceefectsofusingareplication-defectiveadenovirusvec

6、torontheSur-vivlngeneinthecoloncarcinomacelllineSW480andtoinvestigatetheproliferationandapoptosisofSW480cellsafterSurvivingenesilencing．Methods：TostudythebiologicalfunctionofSurvivinincoloncancer，RNAinterferencewasappliedtoknockdownsurvivinexpressionjnthecoloncancercelIJineSW4

7、8Obyrecombinantreplication-defectiveadenoviruspro．ducingSurvivinsinaiIhairpinRNA(Survivin—shRNA)．Theinfectionratesweredetectedatdiferentmultiplicityofinfection(MO1)at48haftertransfectionandtheoptimizedonewaschosenforthesubsequentexperiments．AfterSurvivingenesi—lencing，expressi

8、onofSurvivinmRNAandproteinwasdetectedbyRT-PCRandWesternblot，r