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1、动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定生物化学实验CQMU猪肝组织小核酸的提取及其成分鉴定添教材添教材生物化学与分子生物学实验室2008.09【实验目的】【实验目的】1、学习离心技术，掌握1、学习离心技术，掌握离心机的止确使用。离心机的正确使用。2、了解木实验设计思路。2、了解本实验设计思路。生物大分子的分离提取原则生物大分了的分离提取原则生物大分了分离提取原则是以生生物大分了分离提取原则是以生物大分子的理化性质（分子大小、形物大分子的理化性质（分子大小、形状、溶解度、带电性质等）为依据，状、溶解
2、度、带电性质等）为依据，周密设计分离提取流程图，将目的分周密设计分离提取流程图，将口的分了与其他分了分离提纯的过程。子与其他分子分离提纯的过程。生物大分子的分离提取原则生物大分子的分离提取原则生物大分子的分离提取工作是一件十分细致的工作，可谓系统工程，既要设法得到目的分子的纯品，乂要努力保持其生物学活性，还要得率高。生物人分子的基木制备技术生物大分子的基本制备技术生物大分了的制备过程包扌舌：选材、细胞破碎和细胞器分离、生物大分了的分离提取、样品纯化、样品浓缩干燥和储存等方面。分离纯化的基本步骤分离
3、纯化的基本步骤1、取材2、组织细胞破碎1、取材2、组织细胞破碎3、提取3、提取4、分离纯化4、分离纯化5、结iii'i6、分析鉴定5、结晶6、分析鉴定分离纯化蛋白质的总原则分离纯化蛋门质的总原则、选择冃的蛋口含量较高的材料；、选择目的蛋白含量较高的材料；、弄清欲纯化的蛋白质在各种试剂和拟采用、弄清欲纯化的蛋白质在齐种试剂拟采用的条件下稳定性如何；的条件下稳定性;、探索和应用有效的抽提和粗提纯方法；、有效的抽提和粗提纯方法；、建立一套层析方法进提纯；、建立一套层析方法进行细提纯；、用较好的取物；、用
4、较好的方法保存提取物；、提取蛋鉴定。、提取蛋白质的纯度鉴定。离心技术离心机根据应用目的分为制备和分析两种用途。制备用离心机是应用最广泛的离心机，根据其性能叮分为低速离心机、高速离心机和超速离心机。离心机和离心法离心机和离心法一种通过使样品绕离心转轴的中心一种通过使样品绕离心转轴的心旋转而在其上产生一个远大于地球重力旋转而在其上产生一个远大于地球重力的仪器。的仪器。不同大小、不同形状、不同密度的不同大小、不同形状、不同密度的颗粒在同一离心力场内会以不同的速度颗粒在同一离心力场内会以不同的速度沉降而分
5、离。颗粒的沉降速度取决于离心机的转颗粒的沉降速度取决于离心机的转速和颗粒与中心轴的距离。速和颗粒与中心轴的距离。离心力的计算离心力的计算离心机的加速度通常用重力加速度离心机的加速度通常用重力加速度-2-2g9.80m.s的倍数表示，被称为相对离心g9.80m.s的倍数表示，被称为相对离心力RCF或g值。力RCF或g值oRCF取决于转子的转数n,以每分钟转RCF取决于转子的转数n,以每分钟转数计,r/min和旋转半径r,以nrni计：数计,r/min和旋转半径r,以nun计：nn22RCF1.118
6、rRCF1.118rlOOO1000RCF在离心管内不相同，靠转子外最大，RCF在离心管内不相同，靠转子外最大，靠中心轴最小，有表可查。靠中心轴最小，有表可查。离心机种类及用途离心机种类及用途1、低速离心机1、低速离心机常规使用，台式，最大速度3000^6000r/min,常规使用，台式，最大速度3000〜6000r/min,RCF可达6OOOgo常用于收集细胞、细胞核或RCF可达6000g。常用于收集细胞、细胞核或叶绿体等较大的细胞器、抗原-抗体复合物等叶绿休等较大的细胞器、抗原-抗休复合物等粗
7、颗粒沉淀。粗颗粒沉淀。2、高速离心机2、高速离心机较大立式，常有制冷系统。最高速率可达较大立式，常有制冷系统。最高速率可达25000r/min、RCF达60000g。用T分离微生25000r/min、RCF达60000g。用于分离微生物细胞、线粒体、溶酶体等细胞器和蛋白质沉物细胞、线粒体、溶酶体等细胞器和蛋门质沉淀物。淀物。3、超速离心机3、超速离心机一类速度非常高的离心机最大转速一类速度非常高的离心机，最大转速可超过30000r/min,最大RCF可达600000g可超过30000r/min,最
8、大RCF可达600000g,用于沉淀核糖体、膜泡等小的细胞器和生,用于沉淀核糖体、膜泡等小的细胞器和生物大分子。具有精密的制冷、真空装置。物大分子。具有精密的制冷、真空装置。4、微量离心机4、微量离心机台式,能迅速加速到12000r/min,10000g台式,能迅速加速到12OOOr/min,10OOOg用于短时间0.5~1.5min对大颗粒沉淀、小用T*短吋间0.5~1.5min对大颗粒沉淀、小体积溶液小于1・5ml的沉降，尤其用于从液体积溶液小于1.5ml的沉降，尤其用于从液体
