实验十三卵磷脂的提取及其组成鉴定

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1、实验十三卵磷脂的提取及其组成鉴定一、实验目的学习从蛋黄中提取卵磷脂的实验方法。巩固抽滤等基本操作。主讲教师：二、基本原理卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中含量较高，约8％。可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。卵磷脂可在碱性溶液中加热水解，得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱，可从水解液中检查出这些组分。其分离提取的流程如下：卵磷脂彻底水解的产物是什么？完全水解HOCHCH2OHCH2OHR1COOHR2COOH+CH2CH2N(CH3)3HOOH－POHOOHOH甘油脂肪酸磷酸胆碱答：三、仪器和药品仪器：研钵布氏

2、漏斗蒸发皿棉花药品：熟鸡蛋黄20％NaOH溶液10％Pb(AC)21％CuSO4溶液硫酸95％乙醇氯仿丙酮碘化铋钾溶液四、实验步骤1．卵磷脂的提取（1）取熟鸡蛋蛋黄一只，于研钵中研细，先加入10ml95％乙醇研磨，再加入10ml95％乙醇充分研磨，减压过滤(应盖满漏斗)，布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移入研钵中，再加10ml95％乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并二次滤液，如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入蒸发皿内。（2）将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干，得到黄色油状物。（3）冷却后，加入5ml氯仿，搅拌使油状物完全溶解。（4）在搅

3、拌下慢慢加入15ml丙酮，即有卵磷脂析出，搅动使其尽量析出（溶液倒入回收瓶内）。2．卵磷脂的水解及其组成鉴定（1）水解：取一支干燥大试管，加入提取的一半量的卵磷脂，并加入5ml20％氢氧化钠溶液，放入沸水浴中加热10分钟，并用玻棒加以搅拌，使卵磷脂水解，冷却后，在玻璃漏斗中用棉花过滤。滤液供下面检查用。（2）检查脂肪酸的检查：取棉花上沉淀(滤饼)少许，加1滴20％氢氧化钠溶液与5ml水，用玻棒搅拌使其溶解，在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液，以硝酸酸化后加入10％醋酸铅2滴，观察溶液的变化甘油的检查：取试管一支，加入1％硫酸铜溶液1ml(

4、二十滴)，2滴20％氢氧化钠溶液，振摇，有氢氧化铜沉淀生成，再加入1ml水解液振摇，观察所得结果。胆碱的检查：取水解液1ml，滴加硫酸使其酸化（以pH试纸试之）加入1滴克劳特试剂（碘化铋钾溶液），有砖红色沉淀生成。[注释]1.第一次减压过滤，因刚析出的醇中不溶物很细以及有少许水份，滤出物浑浊，放置后继续有沉淀析出，需合并滤液后，以原布氏漏斗（不换滤纸）反复滤清。2.蒸去乙醇时，可能最后有少许水份，需搅动加速蒸发，务使蒸干。3.黄色油状物干后，蒸发皿壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中，否则会带入杂质。4.搅动时，析出的卵磷脂可粘附于玻棒

5、上，成团状。5.加热时，会促使胆碱分解，产生三甲胺的臭味。6.加硝酸酸化，脂肪酸析出，溶液变浑浊，加醋酸铅有脂肪酸铅盐生成，浑浊进一步增强。7.生成的氢氧化铜沉淀．因水解液中的甘油与之反应，生成甘油铜，沉淀逐步溶解。8.克劳特试剂为含有KI－BiI3复盐的有色溶液，与含氮碱性化合物如胆碱生成砖红色的沉淀。思考题：1．蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理？2．卵磷脂可以皂化，从结构分析应作何解释？3．卵磷脂可作乳化剂，这是为什么？4．为什么实验中要进行减压过滤？操作时应注意哪些地方？R1-COO-CH2R2-COO-C—HCH2—O—P—O—R

6、OHO12*3R1常为饱和脂肪酸如C16，C18R2常为不饱和脂肪酸如花生四烯酸R=—CH2CH2-N(CH3)3OH为：卵磷脂+-+-HO-CH2CH2-N(CH3)3OH胆碱Question5卵磷脂彻底水解的产物是什么？CO2-CH2CO2-CHCH2O-P-O-CH2CH2-N(CH3)3OO+HOH-由于甘油磷脂分子中磷酸部分还有一个可以电离的H+，而胆碱或胆胺部分又有碱性基团，故甘油磷脂以偶极离子的形式存在。非极性端疏水端，亲油端磷脂分子中同时具有疏水基和亲水基。正是由于这种特点，使得磷脂类化合物在细胞中起着重要的生理作用。

7、-极性端疏油端，亲水端H-OH