动物组织中总RNA的提取.doc

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1、动物组织中总RNA的提取1、取20--40mg的组织，转移至预冷的研钵预冷的研钵：取干净的研钵，加入1/3左右的液氮，四周晃动，使研钵冷却液氮研磨至粉末：少量（淹没组织）多次加入研钵中，然后研磨，最后一次可多加入中，加液氮研磨至粉末；不同样品，使用组织的量RNA丰富的组织（如肝脏）不超过30mgRNA含量低的组织（如肌肉）不超过100mg使用组织的量小于20mg时R-I，R-II和异丙醇的量都减半使用组织的量小于40mg时R-I，R-II和异丙醇的量按比例增加2、向研钵中加入400μlBuffer

2、-R-I，用装有21-25号针头的注射器反复抽吸8-10次，并转入1.5ml离心管（试剂盒内提供）用移液枪去400μlBufferR-I，在所有粉末处反复抽吸，结果研钵中加样处会呈白色凝固状态，要将研钵放置，等其溶解，然后转入1.5ml离心管；3、加入150μlBuffer-R-II，漩涡振荡15-30s，12000×g离心5min；4、取上述上清液至另一1.5ml离心管，加入250μl异丙醇，混合均匀；5、将制备管置于2ml离心管制备管就是一个小管子，里面会有膜，能起到过滤的作用，滤液会过滤到离

3、心管中，而RNA留在制备管（试剂盒内提供），转移步骤4中的混合液到制备管中，6000×g离心1min6、弃掉滤液，将制备管重新置于2ml离心管中，加入500μlBuffer-W1A，12000×g离心1min7、弃掉滤液，将制备管重新置于2ml离心管中，加入700μlBuffer-W2，12000×g离心1min8、重复操作79、弃掉滤液，将制备管重新置于2ml离心管中，12000×g离心1min1、将制备管放入干净的1.5ml的离心管中，在制备管膜中央加70-100μlBuffer-TE（DNa

4、seandRNase-free）或RNase-free水2、室温静置1min，12000×g离心1min，洗脱得到RNA。洗脱RNA：扔掉制备管即可，因为RNA已经洗脱到离心管中