动物组织总RNA提取实验操作.pdf

《动物组织总RNA提取实验操作.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、常规动物组织总RNA提取(Trizol法)实验操作流程1摘要本标准操作规程适用于一般动物组织的总RNA提取，一般情况下能得到高质量的总RNA。2提取步骤a)用液氮预冷研钵，组织样品放入加有液氮的研钵中，在液氮下把组织样品充分研磨成粉末。b)把样品粉末转入到装有TRIzol裂解液的2.0mLEP管中，（每mL裂解液可加50mg组织样品）剧烈震荡，充分混匀，平放室温静置5-10min。c)10000rpm，4℃离心5min。d)吸取上清液至新的2.0mLEP管中，每毫升裂解液加入200μL氯仿/异戊醇，剧烈颠倒混匀。e)10000rpm，4℃离心10min。

2、f)吸取上清液至新的1.5mL离心管，注意不要吸到中间蛋白层，加入等上清液体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀。g)放入-20℃冰箱沉淀1h。h)13600rpm，4℃离心20min。i)吸弃上清，加入1mL75%乙醇，用移液器吹洗沉淀。j)10000rpm，4℃离心3min，吸弃上清，短暂离心，吸去残留液体，晾干3-5min。k)用30-100μLDEPC水或者RNase-free水溶解沉淀。3设备与试剂3.1设备型号名称5417高速冷冻离心机3.2试剂货号名称15596-026TRIZOLAM9915DEPCwater500ml三氯甲烷500ml异戊醇500m

3、l无水乙醇(分析纯)终止符