木耳总 RNA提取方法研究.pdf

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1、浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis，2014，26(2)：456-460http：／／www．~nyxb．an熊毅，郭彦萃，张志．木耳总RNA提取方法研究[J]．浙江农业学报，2014，26(2)：456-460．DOI：10．3969／j．issn．1004-1524．2014．02．37木耳总RNA提取方法研究熊毅，郭彦萃，张志(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江齐齐哈尔161006)摘要：为了获得木耳总RNA理想的提取方法，为后续的分子生物学研究打下基础，以木耳菌

2、丝为试验材料，采用了CTAB法、RNApreppurePlantKit试剂盒和Trizol法3种方法提取木耳总RNA。结果表明3种方法均能从木耳菌丝中提取分离到总RNA，然而Trizol法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA，28S及18S带型清晰无弥散，A：60／A。。值为1．91，RNA产率为682．64Ixg·g～，提取的总RNA适用于RT—PCR等分子生物学试验研究。关键词：木耳；RNA提取；Trizol法；RT．PCR中图分类号：S646．6文献标志码：A文章编号：1004．1524(2014)0

3、2-0456-05StudyonmethodsforRNAextractionfromAuriculariaauricularXIONGYi，GUOYah—cui，ZHANGZhi(Collegeof三Se&nceandAgricultureandForestry，QiqihaerUniversity，Qiqihaer161006，China)Abstract：ThepurityandintegrityoftotalRNAareessentialformolecularbiologyexperimentsof

4、Auriculariaauricular．InordertoobtainanidealtotalRNAextractionmethod，totalRNAofAuriculariaauricularwasextractedwith3methods，includingTrizolmethod，CTABmethodandRNApreppurePlantKitmethod．TheresultsshowedthatallthesemethodscanextracttotalRNAfromAuriculariaauric

5、ular；however，theTrizolmethodwasthebestwithhighintegrityandpurity．Thebandof28Swastwicewiderthanthatof18S．rI’l1eRNAyieldwas682．64Ixg·gandtheRNAsamplecouldbeusedforRT·PCR．Keywords：Auriculariaauricular；RNAextraction；Trizolmethod；RT—PCR木耳属担子菌纲，木耳目，木耳科，是人们主富的营养价值

6、外，木耳的药用价值也得到越来越要的食用菌之一，在各国各地都有分布。主要在多人的重视，其中木耳多糖具有提高免疫、抗栎、杨、榕、槐等120多种阔叶树的腐木上单生或肿瘤J、抗氧化、抗凝血J、抗血栓[、降血群生。木耳是一种药食兼用的真菌，营养又美脂以及保护机体细胞。。等作用。味，而且蛋白质、钙、维生素、铁、粗纤维等的含量基于木耳有如此多的功能和价值，从分子生都十分丰富，此外还含有多种微量元素和对人体物学的角度来研究木耳在今后的发展中已成必有益的氨基酸，被称为“素中之荤”l2J。除了丰然之势，但木耳分子生物学领域的研究

7、刚起步，高质量RNA的获得是进行Northern分析、RT—PCR、cDNA文库构建及体外翻译等分子生物学收稿臼期：2013-03．29基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目(1551538)研究的重要前提。由于RNA不稳定、易降解，提作者简介：熊毅(198O一)，男，黑龙江齐齐哈尔人，讲师，在读博取的RNA质量不好，在反转录时往往无法合成士研究生，研究方向为植物应用及生态研究。E—mail：xiongyiabc@163．corn理想的cDNA，给后续研究带来诸多不便_】。熊毅，等．木耳总RNA提取方法研究

8、目前关于RNA提取的方法有许多种，其中min离心10min，弃去上清液，接着进行2次SDS[12]、CTAB法㈣、热硼酸盐法㈨、冷酚法LiC1沉淀操作；沉淀用70％乙醇洗涤2次，晾干及商品化的Trizol试剂盒较为常用¨。对于木RNA，加入40LDEPC水溶解，所得RNA溶液耳总RNA的提取方法研究尚未见报道，鉴于此，为接下来检测备用。．本研究采用3种方法提取木耳菌丝的总RNA，以1．3．2RNA提